Producción CyT
Congreso
Autoría
Boselli, Victoria
;
Pezza, Alejandro
;
Serra, Esteban
;
PERDOMO, VIRGINIA GABRIELA
Fecha
2019
Editorial y Lugar de Edición
SBR
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
Trypanosoma cruzi es el protozoo parásito flagelado causal de la enfermedad de Chagas. La acetilación de proteínas en residuos de lisinas es una modificación postraduccional dinámica, altamente regulada y reversible, que regula diversas funciones proteicas como: interacciones proteína-proteína, interacciones proteína-ADN, cambios en la localización subcelular, regulación de la actividad enzimática y/o estabilidad. El &...
Trypanosoma cruzi es el protozoo parásito flagelado causal de la enfermedad de Chagas. La acetilación de proteínas en residuos de lisinas es una modificación postraduccional dinámica, altamente regulada y reversible, que regula diversas funciones proteicas como: interacciones proteína-proteína, interacciones proteína-ADN, cambios en la localización subcelular, regulación de la actividad enzimática y/o estabilidad. El único dominio protéico conocido capaz de reconocer lisinas acetiladas es el Bromodominio. Existen 7 secuencias codificantes para proteínas con bromodominios en trypanosomatidos, en T. cruzi se denominan BDF1-5, BDF6 y BDFATPasa. Estas secuencias son muy divergentes y difíciles de asignar filogenéticamente a un grupo de bromodominios caracterizado en mamíferos, sugiriendo que podrían encontrarse inhibidores selectivos que pudieran servir como antiparasitarios (particularmente en el tratamiento de la Enfermedad de Chagas). Como objetivo de este trabajo nos propusimos evaluar la funcionalidad de TcBDF6 en la morfología y replicación de epimastigotes de T. cruzi. Metodología: El gen de BDF6 fue delesionado en epimastigotes de T. cruzi (cepa Dm28c; aislada de la comadreja Didelphis marsupialis, hospedador mamífero), mediante la técnica de CRISPR-Cas9. La selección y mantenimiento de estos parásitos carentes de la expresión de BDF6 (Dm28cBDF6-/-) se realiza mediante el agregado de Geneticina (G418) y Blasticidina. La ausencia del gen de BDF6 fue corroborada mediante PCR. Los cultivos tanto de la cepa salvaje (Dm28c, grupo control) como de Dm28cBDF6-/-, fueron mantenidos a 28°C en medio de cultivo LIT (10% suero fetal bobino) con pasajes a medio fresco cada 3‐5 días. Para evaluar posibles cambios morfológicos en la cepa mutante Dm28cBDF6-/-, epimastigotes de ambas cepas se tiñeron con la coloración de Giemsa. Se obtuvieron microfotografías en microscopio óptico (60X), y se cuantificaron parámetros morfológicos (ancho, largo, área) de los parásitos (se analizaron al menos 500 epimastigotes por preparado, 3 preparados por grupo). Para evaluar la replicación de T. cruzi, se realizaron curvas de crecimiento de los parasitos. Brevemente, a partir de un inoculo inicial de 5x106 parasitos/ml, por triplicado, se cuantificó el número de epimastigotes/ml, a diario durante al menos 7 días. Al mismo tiempo, se realizaron tinciones con el colorante vital Eritrosina y se cuantificó el % de viabilidad celular. Resultados: Mediante la técnica de CRISPR-Cas9 se obtuvo el mutante homocigota Dm28cBDF6-/- , demostrando que la proteína no es esencial para el desarrollo de los epimastigotes de T. cruzi. Sin embargo, observamos una disminución de un 35% en las tasas de crecimiento de los Dm28cBDF6-/- (en relación al grupo control); este efecto parecería deberse a una disminución en la velocidad de replicación de los epimastigotes, y no a una mayor mortandad de los mismos, debido a que el análisis de viabilidad celular arrojó valores similares entre ambos grupos experimentales. Por último, al analizar las características morfológicas de los parásitos no se observaron cambios significativos en ninguno de los parámetros estudiados. Estos resultados sugieren que TcBDF6 es responsable, al menos en parte, de la regulación de la replicación en epimastigotes de T. cruzi, sugiriendo que podría llegar a ser un posible blanco terapéutico para el tratamiento de la enfermedad de Chagas.
Ver más
Ver menos
Palabras Clave
epigeneticaepimastigotesTcBDF6Enfermedad de Chagas