Producción CyT
Congreso
Autoría
Fecha
2010
Editorial y Lugar de Edición
Fundación Revista Medicina (Buenos Aires)
ISSN
0025.7680
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
La práctica médica requiere de estudios moleculares complejos como la hibridación de sondas fluorescentes ?in situ? o su acrónimo del ingles ?FISH?. Esta técnica es la principal herramienta para estudios citogenéticos requeridos para determinar el análisis en médula de Leucemias, líquido amniótico de embarazos en curso, cardiopatías congénitas y cáncer de mama entre otras. En muchos de estos casos se requ...
La práctica médica requiere de estudios moleculares complejos como la hibridación de sondas fluorescentes ?in situ? o su acrónimo del ingles ?FISH?. Esta técnica es la principal herramienta para estudios citogenéticos requeridos para determinar el análisis en médula de Leucemias, líquido amniótico de embarazos en curso, cardiopatías congénitas y cáncer de mama entre otras. En muchos de estos casos se requiere rapidez y, a veces, confirmaciones con otras sondas. Nuestro objetivo es la obtención de un tratamiento que preserve la muestra de ADN permitiendo aplicar la técnica de FISH varias veces a una misma célula. Para ello los extendidos celulares fueron desnaturalizados en una nueva solución de desnaturalización fría (NaOH en Etanol) y luego son deshidratados para preservar el DNA desnaturalizado. La hibridación se realizó con sondas diluidas en una mezcla de hibridación modificada y desnaturalizadas por calor. Cada preparado se incubó 30 minutos a 45° C, se enjuagó el exceso de sonda y se tiñó con DAPI para observar al microscopio de fluorescencia. En las rondas de hibridación subsiguientes los tiempos de desnaturalización se redujeron a 30 segundos. Esta técnica fue puesta a punto para fijaciones de líquidos amnióticos, médula, sangre periférica y semen. En todos los casos se lograron hibridaciones sucesivas (2 a 5) que pudieron ser analizadas el mismo día, preservando la morfología cromosó- mica a lo largo de todo el proceso. En ningún caso se observaron trazas de hibridaciones anteriores que pudieran dar lugar a confusiones de interpretación. Concluyendo, la desnaturalización del ADN genómico mediante NaOH permite con sondas múltiples de FISH hasta 5 hibridaciones sobre la misma célula en horas. Este nuevo procedimiento facilita y permite el análisis de alteraciones citogenéticas complejas en leucemias y también podría emplearse para el diagnóstico genético preimplantatorio.
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Palabras Clave
Citogenetica molecularcromosomasFISHesperma