Producción CyT
Congreso
Autoría
Fecha
2008
Editorial y Lugar de Edición
AAM
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
El virus Tacaribe (VTac) es el prototipo de los arenavirus del “Nuevo Mundo”, grupo que incluye los 5 patógenos productores de fiebres hemorrágicas conocidos en Sudamérica: los virus Junín (VJun), Machupo, Guanarito, Sabia y Chapare. El genoma de VTac posee dos segmentos de ARN de simple cadena, denominados L y S. En el segmento L, se encuentran codificadas la proteína L (ARN polimerasa viral) y una pequeña proteína llamada Z, la cual...
El virus Tacaribe (VTac) es el prototipo de los arenavirus del “Nuevo Mundo”, grupo que incluye los 5 patógenos productores de fiebres hemorrágicas conocidos en Sudamérica: los virus Junín (VJun), Machupo, Guanarito, Sabia y Chapare. El genoma de VTac posee dos segmentos de ARN de simple cadena, denominados L y S. En el segmento L, se encuentran codificadas la proteína L (ARN polimerasa viral) y una pequeña proteína llamada Z, la cual posee un rol central en la brotación de las partículas virales. El segmento S codifica para la nucleoproteína (N) y para el precursor (GPC) de las glicoproteínas de envoltura. El precursor GPC es procesado en forma posttraduccional por proteasas celulares en tres unidades que, asociadas mediante interacciones no covalentes, conforman el complejo glicoproteico maduro. Estas unidades son: el péptido señal (SP), que es miristilado e intervendría en el tráfico intracelular de GPC, la proteína G1 que estaría involucrada en el reconocimiento de receptores celulares, y G2 que participaría en la fusión de la envoltura del virión con la membrana de la célula infectada. A su vez, en G2 se definen tres regiones: la región ectocitoplásmatica, la región transmembrana (TM) y el dominio citoplasmático (CTD). Con el objetivo de estudiar las bases moleculares de la morfogénesis de arenavirus, nuestro grupo ha desarrollado un sistema de genética reversa basado en la coexpresión (a partir de plásmidos transfectados) de las proteínas L y N de VTac y Z y G de VJun, en conjunto con un minigenoma análogo al ARN S de VTac (MG). Este sistema reconstituye la transcripción, la replicación y la incorporación del MG a partículas de tipo viral (PTVs). En este trabajo, analizamos los requerimientos para la incorporación de las glicoproteínas a PTVs. Para eso, las células transfectadas fueron marcadas con precursores radioactivos. Los sobrenadantes celulares fueron colectados y las PTVs producidas fueron concentradas por ultracentrifugación y analizadas en forma paralela con los lisados celulares por Inmunoprecipitación (IP). Los resultados indicaron que la eficiencia de incorporación de las glicoproteínas a PTVs, medida como la relación entre la cantidad de G1 y la de Z incorporadas, fue de 5 a 10 veces mayor en PTVs producidas por células en las que GPC fue coexpresada con Z y N, respecto a las producidas en células en las que GPC y Z fueron coexpresadas en ausencia de N. Para comenzar a definir los motivos implicados en la incorporación de las glicoproteínas a PTVs, se evaluaron mutantes de GPC con modificaciones en los motivos relevantes para la biogénesis del complejo glicoproteico maduro. Se utilizó una mutante (G2A) que contiene una substitución que impide la miristilación del SP, así como una mutante con modificaciones en la secuencia consenso de clivaje del precursor GPC a G1 y G2. Por otra parte, se construyeron mutantes con deleciones en la zona carboxiterminal de G2, así como también una quimera en la cual se reemplazó la zona CTD de VJun por la correspondiente a la glicoproteína de membrana CD4. En primer lugar se analizó la expresión de los GPC mutantes por IP e inmunofluorescencia indirecta. Posteriormente, se evaluó tanto la incorporación de las diferentes glicoproteínas mutantes a PTVs marcadas por IP, así como la capacidad de las mismas de mediar la transferencia del MG a nuevas células en ensayos de infección. CONCLUSION: Los resultados obtenidos indican que la miristilación del precursor GPC o el correcto procesamiento del mismo a G1 y G2, no conforman un requisito indispensable para la incorporación de las glicoproteínas a las PTVs. Por otro lado, se discutirá la importancia de las regiones TM y CTD de GPC para el correcto ensamblado e infectividad de las PTVs.
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Palabras Clave
ensambladoGlicoproteinasvirus Tacaribe