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Invet - Puesta a punto de la técnica de Multilocus Sequence Typing para caracterización de aislamientos argentinos de Streptococcus equi subsp zooepidemicus. Comunicación preliminar
Congreso
Autoría:
Sarcone, Noemí ; Retamar, Gabriela ; Pérez, Agustina ; BUSTOS, CARLA PAOLA ; Guillemi, Eliana ; Muñoz, AlejandraFecha:
2017Editorial y Lugar de Edición:
Facultad de Ciencias Veterinarias UBAResumen *
Streptococcus equi subsp. zooepidemicus (S. zooepidemicus) es un patógeno oportunista, considerado parte de la microbiota normal de nasofaringe y vagina. Se lo asocia con enfermedades como endometritis, placentitis, neumonía, entre otras. S. zooepidemicus posee gran variabilidad genética, por lo tanto, para poder discriminar aislamientos se recurre al estudio de genes housekeeping; estos genes no sometidos a presión de selección, son conservados y generalmente asociados a funciones básicas de los organismos. Para la genotipificación de S. zooepidemicus, la técnica de Multilocus sequence typing (MLST) es la herramienta más utilizada internacionalmente. El objetivo fue poner a punto la técnica de MLST para caracterizar aislamientos argentinos de S. zooepidemicus. Se utilizaron aislamientos de S. zooepidemicus del cepario de la Cátedra de Enfermedades Infecciosas, FCV, UBA, obtenidos a partir de muestras de mucosa vaginal, clítoris, útero, mucosa nasofaríngea, pulmón y linfonódulos. Se extrajo el ADN por ebullición y se confirmó su identidad por biología molecular con la amplificación del gen sodA. Para realizar la técnica de MLST se amplificaron por PCR los fragmentos de siete genes de S. zooepidemicus según fue descripto por Webb (2008); a saber: carbamato kinasa (arcC), ribonucleosido-difosfosfato reductasa (nrdE), propyl-tRNA sintetasa (proS), signal peptidasa I (spi), thymidylato kinasa (tdk), triosefosfato isomerasa (tpi) y acetyl-CoA acetyltransferasa (yqiL). Posteriormente se procedió a la purificación de los productos de PCR por precipitación con EDTA 125 mM y etanol absoluto para su posterior secuenciación por electroforesis capilar en la Unidad de Genómica del Instituto de Biotecnología CICVyA del INTA Castelar. Para la edición, el análisis y el alineamiento de las secuencias nucleotídicas se trabajará con los softwares BioEdit, Nucled Acid Sequence Massager, CAP3 Sequence Assembly Program y Clustal Omega versión 1.2.1. Se compararán las secuencias obtenidas con las publicadas en GenBank (National Center for Biotechnology Information, NCBI). Para determinar los alelos de los aislamientos locales se utilizará la base de datos internacional disponible en http://pubmlst.org/szooepidemicus/. Se logró amplificar los 7 genes en los 6 aislamientos trabajados. Se seleccionó el perfil de los siete genes para uno de los aislamientos (UBA47b1) y se enviaron a secuenciar los productos de las reacciones de PCR previamente purificados, confirmando con las secuencias que eran los genes buscados. Hasta el momento, existen alrededor de 366 secuencias diferentes de S. zooepidemicus en el mundo. El conocimiento de la epidemiología molecular de este agente a nivel local contribuirá a detectar posibles fuentes de infección, brotes y a profundizar el conocimiento en diferentes aspectos de la patogenia aún no resueltos. Comparar los aislamientos de mucosas sanas con los de muestras clínicas permitirá corroborar si los S. zooepidemicus causantes de enfermedad son las mismas cepas que las obtenidas de animales clínicamente sanos. Información suministrada por el agente en SIGEVAPalabras Clave
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