Organelas celulares. Aislamiento y separación de macromoléculas

Producción CyT

Capítulo de Libro

Autoría

María C. Estevéz ; ARGAÑARAZ, MARTIN EDUARDO

Fecha

2008

Editorial y Lugar de Edición

Universidad Nacional de Tucumán

Libro

Conceptos Teóricos y Prácticos Para El Estudio Células y Biomoléculas (pp. 97-119)
Universidad Nacional de Tucumán

ISBN

978-987-05-5367-0

Resumen Información suministrada por el agente en SIGEVA

Fraccionamiento Celular Los métodos de análisis morfológicos que se aplican en Biología Celular (microscopía óptica, electrónica, Inmunocitoquímica, citoquímica, etc.) permiten fundamentalmente localizar diferentes moléculas u organelas subcelulares. Sin embargo cuando se necesita estudiar la estructura, composición y las características funcionales y metabólicas es indispensable el aislamiento de cantida... Fraccionamiento Celular Los métodos de análisis morfológicos que se aplican en Biología Celular (microscopía óptica, electrónica, Inmunocitoquímica, citoquímica, etc.) permiten fundamentalmente localizar diferentes moléculas u organelas subcelulares. Sin embargo cuando se necesita estudiar la estructura, composición y las características funcionales y metabólicas es indispensable el aislamiento de cantidades importantes de estas organelas. El fraccionamiento celular ha permitido cumplir con estos objetivos, siendo posible alcanzar en los aislamientos el grado de pureza necesario. El hígado de rata se ha usado para los primeros estudios debido a que se trata de un órgano abundante en un tipo celular, pero el fraccionamiento se aplicó a casi todos los tipos celulares y tipos de tejido. El fraccionamiento celular consiste básicamente en la ruptura de las células y la posterior separación de los componentes subcelulares en condiciones biológicas controladas. La ruptura de las células puede realizarse mediante homogeneizadores manuales, mecánicos o por la exposición de éstas a sonido de alta frecuencia (20 KHz), en el proceso conocido como sonicación. Los trozos del órgano o el tejido a estudiar son homogeneizados en un medio de apropiado contenido salino y pH. Las condiciones usuales son: a) medio isotónico, generado por una combinación de sales similar al interior celular o por sacarosa 0,25 M y b) temperatura baja (0-4°C) para preservar enzimas y constituyentes celulares. Como resultado de la homogeneización se consigue una suspensión que contiene núcleos, mitocondrias, lisosomas, membranas de diversos organoides, ribosomas, etc. Esta suspensión se somete a fuerzas centrífugas de diferentes intensidades a los efectos de separar fracciones que contienen los distintos componentes subcelulares.

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