Producción CyT
Congreso
Autoría
Fecha
2015
Editorial y Lugar de Edición
REDBIO
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
Diversas patologías que cursan con procesos inflamatorios crónicos, se encuentran íntimamente relacionadas con el incremento de la presencia de leucocitos polimorfonucleares (PMN) y la producción de especies reactivas del Oxigeno (ERO) y del Nitrógeno (ERN), y con ello del estrés oxidativo y nitrosativo celular, respectivamente. El incremento de medidores inflamatorios genera que células monocíticas de la circulación se diferencien ...
Diversas patologías que cursan con procesos inflamatorios crónicos, se encuentran íntimamente relacionadas con el incremento de la presencia de leucocitos polimorfonucleares (PMN) y la producción de especies reactivas del Oxigeno (ERO) y del Nitrógeno (ERN), y con ello del estrés oxidativo y nitrosativo celular, respectivamente. El incremento de medidores inflamatorios genera que células monocíticas de la circulación se diferencien rápidamente enmacrófagos de tipo M1, con el consecuente reclutamiento de neutrófilos hacia la zona inflamada. A su vez, la enzima mieloperoxidasa (MPO), la principal proteína presente en los neutrófilos, junto a NADPH oxidasa (NOX) y óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) generan grandes cantidades de anión hipocloroso (HOCl-) y peroxinitrito (ONOO-), una de las principales especies reactivas causantes del daño en moléculas cruciales para la supervivencia celular, como ácidos nucleicos. Además, son capaces de oxidar residuos de tirosina de las proteínas, produciendo 3-nitrotirosina (3-NT), en las propias células y el tejidocircundante, en la zona de inflamación. Por lo tanto, el estudio y cuantificación de la actividad de MPO y la producción de 3-NT son de gran valor, tanto para el diagnóstico, como para el seguimiento de diversas enfermedades que cursan con procesos inflamatorios crónicos entre ellas la obesidad y enfermedades del sistema inmunológico como las enfermedades autoreactivas. El objetivo del presente trabajo fue producir anticuerpos específicos contra laenzima MPO y residuos de 3-NT para su posterior utilización en la detección y titulación en muestras humanas. Para ello se realizó un plan de inmunización a 0, 21 y 28 días en conejos experimentales con 3-NT y MPO humana de alta pureza, a una concentración de 50 µg/Kg y conejos controles a los cuales se les inyecto solución fisiológica; cumplido los plazos, se extrajo sangre total de los animales, se separó el suero, el cual fue conservado a 4°C con Timerosal 0.1% hasta su utilización. Los anticuerpos producidos fueron validados utilizandotécnicas de enzimoinmunoanálisis de adsorción con antígenos puros en buffer coating y diluciones de 1:10 a 1:1x106 de los sueros correspondientes, técnicas de western blot e inmunocitoquimica. Los resultados mostraron reactividad a un título de 1:5x103 para anticuerpos contra 3-NT y 1:1x104 para anticuerpos contra MPO. Ensayos de western blot mostraron de forma preliminar reactividad frente a muestras de neutrófilos humanos, aunque deben ser nuevamente confirmados para ensayos de inmunocitoquímica. Los anticuerpos producidos en este protocolo de trabajo presentan reactividad tanto en ensayos de enzimoinmunoanálisis, como de western blot.; aunque restaría diversificar los ensayos, estos anticuerpos tendrían potencial utilidad comercial, no solo para el diagnóstico diferencial, sino también para evaluar la evolución de diversos procesos patológicos mediados por inflamación, aunque quedaría confirmar la utilidad en ensayos de inmunocitoquímica.
Ver más
Ver menos
Palabras Clave
N3TMPODIAGNOSTICOANTICUERPOS