Producción CyT
Tesis
Autoría
CLAUDIA MARCELA SOSA
Fecha
01/01/2016
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
La reacción acrosomal (RA) es un proceso exocitótico regulado, calcio dependiente e irreversible que consiste en la fusión de las membranas plasmática y acrosomal externa en múltiples puntos, en la apertura de poros y la liberación del contenido acrosomal. En esta tesis nos propusimos estudiar aspectos de la cascada de señalización que estimulan el swelling activando la RA con diferentes agonistas y caracterizar temporalmente los eventos i...
La reacción acrosomal (RA) es un proceso exocitótico regulado, calcio dependiente e irreversible que consiste en la fusión de las membranas plasmática y acrosomal externa en múltiples puntos, en la apertura de poros y la liberación del contenido acrosomal. En esta tesis nos propusimos estudiar aspectos de la cascada de señalización que estimulan el swelling activando la RA con diferentes agonistas y caracterizar temporalmente los eventos involucrados en la RA desde que recibe el estímulo hasta que exocita su contenido. Se utilizaron espermatozoides humanos capacitados en presencia o ausencia de inhibidores y luego estimulados con diferentes inductores de la RA. Para los ensayos de cinética de la RA y de apertura de los poros de fusión, los espermatozoides se estimularon en presencia de una lectina fluorescente que ingresa a la vesícula acrosomal al abrirse los poros. Las muestras fueron analizadas por ensayos funcionales de punto final, en población por espectrofluorometría y citometría de flujo, y en célula única de manera dinámica con alta resolución temporal. El swelling acrosomal se estudió por microscopía electrónica. Observamos que los inductores de la RA como los análogos del AMPc -incluso en ausencia total de calcio- indujeron swelling, el cual se bloqueó en presencia de los inhibidores de los canales SOCs y de la adenilato ciclasa. Nuestros resultados indican que el swelling acrosomal es un evento necesario para la RA. Además, el ingreso de calcio a través de los canales SOCs estimulan una adenilato ciclasa que incrementa los niveles de AMPc y activan el swelling. El swelling y la RA son eventos lentos ?del orden de minutos? mientras que la apertura de los poros de fusión ocurre en el orden de segundos. En conclusión, la RA requiere un tiempo de preparación para la exocitosis, relacionado a la cinética del swelling acrosomal y no con la apertura de los poros.
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Palabras Clave
REACCIÓN ACROSOMALCINÉTICA DE LA EXOCITOSISESPERMATOZOIDESAUMENTO DE VOLUMEN DEL ACROSOMA