Producción CyT

Revista Medicina - Producción de una proteína de fusión recombinante entre antígenos de secreción temprana de Mycobacterium tuberculosis Esat-6 y Cfp-10: caracterización inmunológica en células de individuos infectados con el patógeno.

Congreso

Autoría:

Rovetta A ; Rodrigo Hernandez Del Pino ; Recalmde Maria Gabriela ; Delfina Peña ; N. Tateosian ; Gutierrez Marisa ; Domingo Palmero ; Maria Isabel Colombo ; GARCIA, VERONICA EDITH

Fecha:

2014

Editorial y Lugar de Edición:

N/A

Resumen *

ESAT-6 y CFP-10 son antígenos de secreción temprana de M. tuberculosis (Mtb), ausentes en la cepa BCG. Ambos son secretados conjuntamente como complejo 1:1 con capacidad de disminuir los niveles de ROS en macrófagos e inhibir la activación T, perjudicando el correcto funcionamiento del sistema inmune. Así, generamos una proteína de fusión (EC) ESAT-6/CFP-10, emulando el complejo que forman in vivo, para estudiar su inmunogenicidad y efecto sobre la autofagia en células de individuos con infección activa por Mtb (pacientes tuberculososTB) e individuos con infección latente (LTBI). La EC se construyó a partir de plásmidos conteniendo las secuencias de ambos antígenos, amplificando los segmentos y uniéndolos por PCR. Una vez clonada y purificada, se corroboró su secuencia, pureza y capacidad de inducir respuesta inmune. Utilizando células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de TB, LTBI y dadores sanos (DS) estimuladas con EC, evaluamos la producción de citoquinas y proliferación celular. Como resultados previos sugieren que ESAT-6 tendría una participación en la respuesta autofágica en macrófagos infectados, investigamos el efecto de EC en la inducción de autofagia en monocitos de los individuos en estudio. La estimulación de CMSP con la proteína EC, o con las proteínas recombinantes individuales ESAT-6 y/o CFP-10, indujo niveles comparables de IFN-γ por linfocitos T y proliferación celular tanto en TB como en LTBI, pero como se esperaba, no produjo respuesta en DS, corroborando su especificidad Asimismo, el estímulo de EC conjuntamente con lisado de Mtb (Mtb-Ag), inhibió los niveles de IFN-γ frente a los producidos por Mtb-Ag solo (p<0,05). Además, EC indujo mayores niveles de LC3-II (proteína marcadora de autofagia) que ESAT-6 solo, pero observamos una disminución de los mismos al estimular las células con EC+MtbAg. En conjunto, nuestros hallazgos sugieren la potencialidad de la proteína de fusión EC para el estudio de los mecanismos de defensa contra Mtb. Información suministrada por el agente en SIGEVA

Palabras Clave

INMUNIDADLATENCIATUBERCULOSIS