Producción CyT
Congreso
Autoría
Gutiérrez LG
;
Abelleyro MM
;
DE BRASI, CARLOS DANIEL
;
Larripa IB
Fecha
2015
Editorial y Lugar de Edición
SAH
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
Poster Premiado con Mención Especial Introducción: La leucemia mieloide crónica (LMC) presenta una alteración citogenéticacaracterística, el cromosoma Philadelphia (Ph1) producto de una translocaciónrecíproca entre los brazos largos de los cromosomas 9 y 22 [t(9;22)(q34;q11)].El resultado, es un gen quimérico BCR/ABL1 el cual se transcribe y traduce auna proteína oncogénica (p210bcr/abl) que posee elevada actividad tir...
Poster Premiado con Mención Especial Introducción: La leucemia mieloide crónica (LMC) presenta una alteración citogenéticacaracterística, el cromosoma Philadelphia (Ph1) producto de una translocaciónrecíproca entre los brazos largos de los cromosomas 9 y 22 [t(9;22)(q34;q11)].El resultado, es un gen quimérico BCR/ABL1 el cual se transcribe y traduce auna proteína oncogénica (p210bcr/abl) que posee elevada actividad tirosinakinasa (TK), la responsable de la enfermedad. En LMC, los puntos de ruptura enBCR y ABL1 están dispersos sobre intervalos de 4,5kb y 150kb respectivamente.En BCR, el 95% de las veces ocurre entre los exones 13-14 (también llamadosexones b2-b3) en una región denominada M-bcr (Major breakpoint cluster region).Por otro lado, las rupturas en el gen ABL1 se distribuyen sobre los intrones 1ay 1b, lo que representa un gran desafío metodológico para las técnicas degenética molecular debido al gran área que estos intrones comprenden (aprox.150 kb) y que convierte a cada secuencia del gen de fusión en un reordenamientoespecífico de cada paciente. Actualmente, el monitoreo de respuesta molecularen pacientes con LMC se basa en técnicas que evalúan el nivel de transcripcióndel gen quimérico (RT-PCR cualitativa o cuantitativa). Sin embargo, cuando lospacientes alcanzan respuestas moleculares completas, estas técnicas no puedendiscriminar si el clon neoplásico fue erradicado, o si persiste como célularesidual no proliferante. Objetivos: Diseñar una metodología que permita la detección del reordenamiento BCR/ABL1 anivel genómico. Material y métodos: La metodología se basa enPCR-Inversa de Larga Distancia (PCR-I-LD), sobre fragmentos de restricciónespecíficos que contienen el gen BCR. Usando primers que tienen como blancosecuencias cercanas a los dos sitios de restricción Bcl-I que flanquean elcluster del gen BCR, establecimos el patrón de fragmentos del gen BCR de líneagerminal (no rearreglado). Las variaciones en el patrón de productos dePCR-I-LD, reflejaron la presencia de segmentos del gen ABL producto de latranslocación entre los cromosomas 9 y 22. Estos productos de PCR fueronentonces secuenciados y alineadas sobre un genoma de referencia pudiendoelaborar así la construcción del rearreglo BCR/ABL1 para cada paciente. Resultados: Empleando esta nueva metodología basada en PCR-I-LD, fuimos capaces decaracterizar el rearreglo BCR-ABL1 a nivel genómico en cinco pacientes con LMC.Con estos datos se diseñó, una reacción PCR de tamaño estándar ycaso-específica de elevada sensibilidad que nos permitió detectar la presenciadel clon neoplásico en niveles donde las técnicas basadas en expresión nomostraron capacidad de detección del transcripto. Conclusiones: El desarrollo de esta metodología nos proporcionó una nueva herramienta de altasensibilidad aplicable para el seguimiento personalizado de cada caso,especialmente cuando los niveles del trasncripto BCR/ABL1 son indetectables.
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Palabras Clave
Ph1LMCChr22Chr9