Estudio del control de la expresión de genes del regulón RcsB, involucrados en la virulencia de Salmonella Typhimurium, para el desarrollo de vacunas atenuadas

Tesis

Resumen *

El género Salmonella está formado por bacilos gram-negativos, anaerobios facultativos ygeneralmente móviles. Este género es capaz de crecer en suelo y agua, siendo losproductos lácteos crudos, verduras, huevos y productos cárnicos los reservoriosprincipales. Se ha demostrado que Salmonella es el agente causante de la enfermedadde transmisión alimentaria denominada salmonelosis.En esta Tesis demostramos por primera vez que la proteína Wzzst es requerida paramantener el equilibrio entre las modificaciones del lípido A, por L-Ara4N y pEtN,dependientes de la activación del sistema PmrAB. Además, demostramos que losproductos de pbgE2 y pbgE3 son requeridos para la formación de la región ?S? delantígeno O. Por otro lado, presentamos pruebas contundentes que demuestran que el Ag-O como las modificaciones del lípido A son requeridas para resistir a la acción no solo delcomplemento del suero sino también a la de diversos péptidos catiónicos, durante lainfección. Además, observamos que la eliminación de wzzst, pbgE2 o pbgE3 revierte elfenotipo exacerbado de motilidad presentado por la mutante rcsB. Si bien hasta elmomento no hemos podido determinar el mecanismo por el cual se produce dichareversión, sabemos que ésta no se produce por un cambio en la expresión de genesflagelares ni en la cantidad de flagelos presentes en la superficie de las bacterias.En este trabajo, determinamos experimentalmente que la expresión del gen dps esinducida por RcsB en un mecanismo de regulación directa, donde este regulador se une auna secuencia consenso localizada en la región promotora del gen. Esta regulación esproducida principalmente durante la fase exponencial, pero continúa hasta la faseestacionaria del crecimiento bacteriano. Además, determinamos que ésta regulación esnecesaria para incrementar la resistencia a ROS y para la replicación del patógeno encélulas eucariotas. Por último, demostramos por primera vez que la activación del sistemaRcsCDB controla la expresión de los genes del operon std, requeridos para la síntesis yformación de fimbrias. El regulador RcsB ejerce un efecto represor sobre la expresión deloperón std, ya que es capaz de reconocer y unirse a una secuencia consenso localizadaen la región promotora del operón, solapando la caja -35. Esta regulación ocurre en unavía independiente de la acción ejercida por el regulador HdfR sobre dicho operón.En conclusión, estos resultados nos permitieron confirmar la hipótesis planteada enesta Tesis, demostrando que solo la forma fosforilada de RcsB reprime la expresión deiigenes requeridos para establecer la adhesión e invasión del hospedador como los genesdel operón std e induce la expresión de aquellos necesarios para la sobrevida de labacteria dentro del mismo como dps y wzzst. Esta modulación producida constitutivamenteen la mutante rcsC11 genera la atenuación de su virulencia. Estos resultados,representan un avance significativo al conocimiento de la virulencia de Salmonella, quenos permiten avanzar en el desarrollo de vacunas atenuadas o vectores basadas en lamutante rcsC11. Información suministrada por el agente en SIGEVA