Producción CyT
Tesis
Autoría
Fecha
01/01/2010
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
La producción de proteínas heterólogas en células de mamíferos tiene una gran importancia para la producción de productos biotecnológicos. Hoy en día existen varios sistemas diferentes para producción de proteínas recombinantes en sistemas heterologos: producción en bacterias, células de insecto, levaduras, plantas y células de mamíferos. Para muchos requerimientos solamente las proteínas pr...
La producción de proteínas heterólogas en células de mamíferos tiene una gran importancia para la producción de productos biotecnológicos. Hoy en día existen varios sistemas diferentes para producción de proteínas recombinantes en sistemas heterologos: producción en bacterias, células de insecto, levaduras, plantas y células de mamíferos. Para muchos requerimientos solamente las proteínas producidas en células de mamíferos son adecuadas. Solamente en este sistema se producen proteínas conteniendo ácido siálico terminal en sus dominios glucosídicos. El sistema de producción de proteínas en células de insecto mediante el uso de baculovirus fue desarrollado hace 25 años. Los baculovirus son virus específico de insectos, principalmente de lepidópteros, de gran tamaño con genoma de ADN. Estos virus se encuentran en los insectos infectados incluidos en cristales de una proteína denominada polihedrina. Estos cristales son una forma de persistencia en el medio que impide que el virus se inactive por acción de la radiación ultravioleta, temperatura, etc. Cuando estos cristales son ingeridos por otros insectos comienza nuevamente el ciclo vital de este virus. Para cumplir su cometido en el ciclo biológico viral la proteína polihedrina debe ser producida en grandes cantidades, normalmente llega a constituir hasta el 50% de las proteína en una célula infectada. Dado que esta proteína sirve solamente para la conservación del virus en la naturaleza, es prescindible para el crecimiento del virus en cultivos. Esto llevó a Summers y colaboradores a proponer que se podría introducir en el genoma viral otro gen en lugar del gen de la polihedrina y generar un virus recombinante que produjese una proteína heterologa en grandes cantidades. Si bien las cantidades de proteína heterologa que se pueden obtener utilizando este sistema no llega nunca al nivel de la polihedrina, generalmente se obtiene producciones muy altas compatibles con la utilización de este sistema para la producción industrial de proteínas para fines biotecnológicos. El promotor de la polihedrina es activo solamente en ciertas células de insecto, sin embargo el virus es capaz de penetrar muy eficientemente un gran número de células de mamíferos. Recientemente, basado en esta característica del virus, se ha desarrollado un sistema de baculovirus recombinante capaz de producir proteína en células de mamíferos. Este sistema denominado BacMam utiliza la misma metodología que la expresión de proteína bajo el promotor de la polihedrina, excepto que en este caso el trans-gene (TG) que se quiere expresar se coloca en el genoma viral bajo un promotor de mamífero, generalmente algún promotor viral fuerte. El proyecto se orientó al desarrollo de la tecnología necesaria para obtener un sistema de producción de proteínas heterólogas en células de mamíferos utilizando el sistema de baculovirus. La nucleoproteína de influenza (NP) se expresó eficientemente in vivo en un modelo murino, obteniéndose la inducción de respuestas inmunes específicas.
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Palabras Clave
nucleoproteínaSistema BacMam