Producción CyT
Congreso
Autoría
Gimenez S
;
Ramirez R
;
OLEA, FERNANDA DANIELA
;
Hnatiuk A
;
Rodriguez T
;
Pena M
;
Dewey R
;
Abraham G
;
Laguens R
;
Crottogini A
Fecha
2014
Editorial y Lugar de Edición
Sociedad Argentina de Investigación clínica
ISSN
0025-7680
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
Dado que el diafragma se compone de fibras tipo I de gran resistencia al estrés y alto umbral de agotamiento que le permite contraerse unas 20 veces/min durante toda la vida, los mioblastos diafragmáticos (MD) serían una opción más adecuada que los deotros músculos esqueléticos para terapias cardio-regenerativas.Nos propusimos aislar, cultivar y caracterizar MD ovinos, translucirlos con el gen de conexina 43 (cx43) para promover la conexió...
Dado que el diafragma se compone de fibras tipo I de gran resistencia al estrés y alto umbral de agotamiento que le permite contraerse unas 20 veces/min durante toda la vida, los mioblastos diafragmáticos (MD) serían una opción más adecuada que los deotros músculos esqueléticos para terapias cardio-regenerativas.Nos propusimos aislar, cultivar y caracterizar MD ovinos, translucirlos con el gen de conexina 43 (cx43) para promover la conexión entre células, y crecerlos sobre diferentes andamios (?scaffolds?) para su aplicación sobre áreas infartadas en forma de láminas.Métodos: Se obtuvieron biopsias de diafragma ovino que se digirieron con colagenasa. Los MD extraídos se cultivaron sobre un feeder layer de macrófagos (FLM) autólogos activados, se caracterizaron con anticuerpos anti-desmina, α-actina sarcomérica,SERCA-2-ATPasa y Ki-67, y por expresión del gen biogénico myoD (RT-qPCR). Los MD se transdujeron con lentivirus portadores del gen de cx43 y de la proteína verde fluorescente (GFP), previa medición de la eficiencia de transducción (ET) de diversasmultiplicidades de infección (MOI). Finalmente, se cultivaron los MD sobre scaffolds de pericardio bovino (PB; n=8), ácido poliláctico (PLLA; n=8), y matriz extracelular de vejiga de cerdo (ECM; n=8), y se midió la confluencia (C) a 4 días por un score de 0 a 5, siendo 0: 0%C, 1: 1-20%C, 2: 21-60%C, 3: 41-60%C, 4: 61-80%C y 5: 81-100%C. Resultados: Los MD crecieron satisfactoriamente sobre el FLM y fueron positivos para los anticuerpos probados y para el gen de myoD. Con MOI=100 se logró una ET de 70,8% y expresión evidente de Cx43. El score de C fue 0 en PB, 2,6±1,1 en ECM y 4,75±0,5 en PLLA, (p<0,0001 vs. PB y ECM; X±DS, ANOVA-Bonferroni). Conclusión: Los MD fueron exitosamente aislados, cultivados y transducidos. El andamio de PLLA fue el más apropiado para generar láminas. Estos resultados son elprimer paso hacia pruebas de eficacia terapéutica en modelosovinos de infarto de miocardio
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Palabras Clave
OVEJASREGENERACIÓN MIOCARDICAMIOBLASTOS DIAFRAGMATICOS