Mecanismos involucrados en la migración de los neutrófilos a los ganglios linfáticos

Tesis

Resumen *

Contrario al concepto que sostenía que los neutrófilos únicamente migraban al sitio de inflamación y quedaban excluidos en el tráfico a los ganglios linfáticos, se comprobó en los últimos años que estas células tienen la capacidad de migrar a los ganglios linfáticos que drenan al tejido, tanto en contextos inflamatorios no infecciosos como en los causados por patógenos. Pese a haberse demostrado la presencia de neutrófilos en estos órganos linfáticos y estudiado su función, el modo de entrada de estas células al ganglio linfático no está descripto en detalle. Es por ello que el propósito de este trabajo de tesis fue estudiar las rutas de entradas de los neutrófilos a los ganglios linfáticos y las moléculas que podrían estar participando en esta migración. Para ello, mediante las técnicas de citometría de flujo y microscopía confocal y la aplicación de diferentes diseños experimentales (ensayos de transferencia adoptiva, tratamientos con anticuerpos bloqueantes o inhibidores) se propuso analizar la participación de la vía linfática y la vía sanguínea en el influjo de los neutrófilos a los ganglios linfáticos que drenan un tejido en ratones inmunizados y las moléculas involucradas en dichas vías. Se demostró que los neutrófilos tienen la capacidad de acceder a los ganglios linfáticos tanto por vía linfática como por vía sanguínea y que esta migración requiere de la presencia de un estado inflamatorio. A su vez, la estimulación con complejos inmunes (formados por el antígeno y suero dirigido contra el mismo) fue determinante en el reclutamiento por ambas vías al modular la expresión de moléculas involucradas en la migración. Específicamente, la estimulación con complejos inmunes disminuyó la expresión de L-selectina mientras que aumentó la de CXCR3, perfil que coincidió al observado en los neutrófilos de sangre humana luego de la estimulación con complejos inmunes. Cuando se analizó las moléculas implicadas en la migración de los neutrófilos a los ganglios linfáticos, se observó que L-selectina, PSGL-1, Mac-1 y LFA-1 participan en la migración por vía sanguínea, mientras que sólo las integrinas estuvieron involucradas en la migración por vía linfática. Con respecto al papel que juegan los receptores de quimiocinas se determinó que luego del desafío con el antígeno, los neutrófilos presentes en los ganglios linfáticos y el sitio de inflamación expresan un panel heterogéneo de receptores (que incluye a CCR3, CCR4, CXCR2, CXCR3 y CXCR4) mientras que CXCR4 resultó ser el único que aumenta en forma significativa en los neutrófilos de sangre periférica. Cuando se estudió la participación de S1P, se observó que el tratamiento con FTY720 modula la migración de los neutrófilos a los ganglios linfáticos tanto por vía linfática como por vía sanguínea, pero no así la migración al sitio de inflamación, comprobando el rol de S1P solamente en la entrada a los ganglios linfáticos. A su vez, la acción de FTY720 resultó ser directa sobre los receptores para S1P presentes en los neutrófilos, siendo S1PR4 el de mayor expresión y el único que aumentó sus niveles significativamente luego de la estimulación con complejos inmunes. En conclusión, estos resultados permiten dilucidar el mecanismo por el cual los neutrófilos arriban a los ganglios linfáticos que drenan un tejido inflamado y aportan información importante para trasladar dicho comportamiento a otros tipos celulares, para el entendimiento de ciertos eventos que ocurren en determinadas condiciones patológicas o potencialmente para el diseño de intervenciones terapéuticas. Información suministrada por el agente en SIGEVA