Producción CyT
Tesis
Autoría
Fecha
01/01/2012
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
Los procesos reproductivos, para tener éxito, deben estar en armonía y sincronizados con el medio ambiente. Las condiciones desfavorables (por ejemplo, temperaturas extremas, disminución de los nutrientes, exposición a sustancias nocivas, etc.) inducen estrés en los organismos y reprimen la reproducción a través de vías hormonales y nerviosas. De la misma manera, condiciones adecuadas, promueven y garantizan la eficiencia reproductiva. Se ...
Los procesos reproductivos, para tener éxito, deben estar en armonía y sincronizados con el medio ambiente. Las condiciones desfavorables (por ejemplo, temperaturas extremas, disminución de los nutrientes, exposición a sustancias nocivas, etc.) inducen estrés en los organismos y reprimen la reproducción a través de vías hormonales y nerviosas. De la misma manera, condiciones adecuadas, promueven y garantizan la eficiencia reproductiva. Se ha demostrado que las altas temperaturas pueden afectar los distintos eventos reproductivos a través de alteraciones en la proliferación y la apoptosis de células ováricas, así como también inducir la hipersecreción de hormonas esteroideas desde esta glándula. Asimismo, se ha identificado al estrés como posible factor etiológico de la enfermedad quística ovárica (COD, del inglés Cystic Ovarian Disease) y de hecho se ha encontrado una relación estrecha entre los mecanismos neuroendócrinos de respuesta al estrés, la actividad del sistema simpático y la activación celular de la expresión de HSPs. La COD se presenta frecuentemente en vacas lecheras de alta producción, aunque ocasionalmente también se presenta en animales destinados a la producción de carne. Se caracteriza por la presencia de estructuras foliculares de un diámetro mayor al ovulatorio que permanecen en el tiempo ocasionando trastornos en la funcionalidad ovárica. Puede afectar hasta un 15% de las vacas en el período posparto, momento crítico en el que hay una transición desde la preñez a la reanudación de la ciclicidad ovárica. El diagnóstico de COD suele realizarse durante los primeros 60 días posparto y, esta irregularidad lleva a prolongar el intervalo parto-concepción, provocando grandes pérdidas a la producción pecuaria general. En el presente estudio, se han descripto y evaluado los niveles proteicos y de ARNm de algunas proteínas de golpe térmico (HSPs; del inglés Heat Shock Proteins) con el objeto de relacionarlos con la foliculogénesis normal en la especie bovina y estudiar su significancia en la COD. Para tal fin, se trabajó con muestras de ovarios de distintas procedencias: animales sometidos a un modelo experimental de inducción de COD; animales en producción con desarrollo espontáneo de la enfermedad, y muestras obtenidas en frigorífico. Las muestras fueron procesadas de acuerdo a los requerimientos y a los fines de ser utilizadas para la evaluación de la expresión de Hsp27, Hsp60, Hsp70 y Hsp90 mediante inmunohistoquímica y western blot. El estudio de los ARNm de Hsp10, 27, 40, 60 70, 90 y 90 se llevó a cabo por RT-PCR a punto final. Los niveles proteicos de Hsp27, Hsp60, Hsp70 y Hsp90 fueron claramente detectables en todos los estadios del ciclo ovárico bovino. Más aún, la expresión presentó variaciones a lo largo del desarrollo folicular normal y estos patrones de expresión se diferenciaron de los encontrados en ovarios de animales con enfermedad quística tanto inducida como espontánea. Los ARNm cuantificados correspondientes a Hsp10, Hsp27, Hsp40, Hsp60, Hsp70, Hsp90α y Hsp90β también evidenciaron discrepancias en cuanto a su expresión entre estructuras foliculares normales y quísticas. Los resultados de esta tesis y su relación con los reportes de otros autores permitieron arribar a las siguientes conclusiones: 1- Hsp27 y Hsp70, proteínas implicadas en la inhibición de los mecanismos de apoptosis, estuvieron sobreexpresadas en estructuras quísticas espontáneas. Para el caso de Hsp60 los ensayos a partir de ovarios obtenidos en frigorífico permitieron confirmar que la proteína se expresa mayormente en quistes, mientras que sus ARNm parecen estar elevados en granulosa de folículos antrales medianos confirmando lo hallado previamente por otros autores Por su parte, la inmunodetección de Hsp90 mostró similitudes a lo encontrado para Hsp70, y esta correlación en los niveles de expresión podría explicarse teniendo en cuenta las funciones compartidas que cumplen dichas chaperonas; 2- en cuanto a las variaciones de Hsp10 durante la foliculogénesis normal, se observó que los mayores niveles fueron evidentes en folículos antrales respecto a lo observado en estructuras quísticas; lo que se condice con los hallazgos de otros autores en folículos de humanos y de ratón. El ARNm correspondiente a Hsp27, Hsp40 y Hsp70 se expresó de manera similar en la granulosa de los quistes, ya que en todos los casos sus niveles fueron inferiores a los encontrados en folículos antrales pequeños y medianos. La expresión de ARNm de Hsp60 en células de la teca coincidió con los niveles aumentados de la proteína encontrados en quistes espontáneos. Sin embargo, en la granulosa, la mayor expresión se encontró en folículos antrales medianos. Los resultados referidos a la expresión de ARNm correspondiente a las dos isoformas de Hsp90 (α y β) mostraron una baja expresión de Hsp90β en quistes foliculares provenientes de frigorífico y un aumento notable de la cantidad de ARNm de Hsp90α; 3- se han podido establecer relaciones entre algunas de las proteínas estudiadas en la presente tesis (HSPs) y variables descriptas previamente por otros autores como partícipes de la enfermedad quística ovárica en bovinos. En este sentido, proteínas tales como Hsp27, Hsp70, Hsp40 podrían estar involucradas en el desbalance de los eventos de proliferación/apoptosis existente en las estructuras quísticas, inhibiendo a diferentes niveles la muerte celular programada y favoreciendo de esta manera la persistencia de las mismas. Asimismo, las isoformas Hsp90α/Hsp90β mostraron estar relacionadas con los niveles de expresión de los REα y REβ, mediante lo cual se corroboró la implicancia de las HSPs mencionadas en la foliculogénesis normal y en alteraciones de la misma. 4- El modelo experimental utilizado permite el estudio y conocimiento de aspectos difíciles de abordar trabajando con muestras provenientes animales que presentaron la enfermedad de manera espontánea. Sin embargo, hubo diferencias entre el modelo utilizado y los casos espontáneos de quistes obtenidos en frigorífico, lo que podría explicarse por la alta variabilidad de las muestras obtenidas en frigorífico y la falta de información de los animales de los cuales provinieron estas muestras. El trabajo con animales que desarrollaron la enfermedad espontáneamente y de los cuales se conoce la historia podría ayudar a establecer y fijar más variables tales como estado corporal, balance energético, tratamientos previos, etc., que se relacionen con la patogenia de la enfermedad quística ovárica en el bovino.
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Palabras Clave
BOVINOSENFERMEDAD QUÍSTICAHEAT SHOCK PROTEINSOVARIOS