Producción CyT
Tesis
Fecha
01/01/2012
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
TESIS MONICA ALONSO Escherichia coli verocitotoxigénico (VTEC) y enteropatogénico (EPEC) son importantes patógenos relacionados con la Salud Pública. VTEC produce colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH) en humanos. En Argentina, aproximadamente 500 casos de SUH son reportados anualmente presentando la mayor incidencia a nivel mundial (17/100.000 niños en menores de 5 años de edad). Si bien el serotipo VTEC O15...
TESIS MONICA ALONSO Escherichia coli verocitotoxigénico (VTEC) y enteropatogénico (EPEC) son importantes patógenos relacionados con la Salud Pública. VTEC produce colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH) en humanos. En Argentina, aproximadamente 500 casos de SUH son reportados anualmente presentando la mayor incidencia a nivel mundial (17/100.000 niños en menores de 5 años de edad). Si bien el serotipo VTEC O157:H7 se aìsla con mayor frecuencia de casos de SUH, los serotipos VTEC no-O157 no dejan de ser importantes, ya que se aíslan de cerca del 40% de los casos. EPEC produce diarrea acuosa en niños menores de 2 años de edad y es responsable de brotes y de casos de diarreas prolongadas a nivel mundial. En nuestro país es el agente más prevalente aislado en niños con diarrea. EPEC y algunas VTEC tienen la capacidad de producir lesiones de “attaching and effacing” (A/E), que consisten en la adherencia íntima bacteria-enterocito con destrucción de las microvellosidades intestinales. Esta lesión es producida por la intimina (codificada por el gen cromosómico eae) junto a otras proteínas. VTEC produce verocitotoxinas (codificadas por los genes vt1 y vt2) que constituyen el principal factor de virulencia y además, puede sintetizar una enterohemolisina (EhxA) y en las cepas eae-negativas, una proteína autoaglutinante (Saa). EPEC no produce toxinas y puede presentar un pili de tipo IV (BFP), cuya subunidad principal es codificada por el gen bfpA, presente en un plásmido. La presencia o ausencia de esta fimbria permite clasificar a las cepas EPEC en típicas y atípicas, respectivamente. VTEC y EPEC se han aislado de diferentes especies animales y de una amplia variedad de alimentos, incluidos productos de pollo, y en algunas ocasiones se ha asociado el consumo del mismo con casos de SUH. La mayoría de los estudios se han focalizado en la detección del serotipo O157:H7 por lo cual hay escasa información acerca de la presencia de VTEC no-O157 y EPEC en este tipo de alimento. Debido a ello, el objetivo de esta Tesis fue estudiar la cadena de transmisión de VTEC y EPEC en el pollo y sus productos: carcasas, menudos y hamburguesas. Un total de 1916 muestras de pollos y sus productos se obtuvieron desde abril de 2007 a diciembre de 2009 y correspondieron a: • 859 hisopados de cloacas de pollos vivos provenientes de diferentes criaderos y de animales en una planta de faena antes del procesamiento. • 457 hisopados de carcasas de pollo (superficie externa e interna) obtenidas en diferentes comercios de la ciudad de Tandil y de carcasas lavadas listas para envasar en la planta de faena. • 300 menudos y 300 hamburguesas de diferentes comercios de Tandil. En la planta de faena se realizaron 3 muestreos donde se recolectaron 100 muestras de cloacas de animales vivos antes de la faena y 50 carcasas lavadas (superficie externa e interna), en cada uno de los muestreos. En el 2º y en el 3º se tomaron además, muestras del interior de las carcasas evisceradas sin lavar. Para realizar el tamizaje de VTEC y EPEC se detectaron los genes vt1, vt2 y eae por PCR multiplex. Las muestras eae positivas pero vt negativas, fueron consideradas contaminadas con EPEC y las vt positivas pero eae negativas, contaminadas con VTEC. Las muestras que presentaban ambos genes (vt y eae) podían estar contaminadas con VTEC y EPEC o con VTEC portadora de eae. Por lo tanto, a este último grupo se lo denominó VTEC/EPEC. Las colonias individuales se caracterizaron en cuanto a la presencia de genes que codifican diferentes factores de virulencia y a variantes de vt y eae. Además, los aislamientos se caracterizaron fenotípicamente mediante la serotipificación y la fermentación del sorbitol. Los resultados demostraron que en animales vivos (cloacas) la contaminación con EPEC predominó significativamente sobre la de VTEC. Solamemente una muestra de cloaca estaba contaminada con VTEC y pertenecía a un criadero familiar. En las carcasas de pollo también predominó la contaminación con EPEC. Teniendo en cuenta la superficie interna y externa, EPEC predominó en la interna con respecto a la externa, mientras que la contaminación con VTEC se detectó en similar proporción en ambas superficies. En menudos y hamburguesas los porcentajes de muestras contaminadas con EPEC (43% y 21%, respectivamente) fueron mayores a los porcentajes de contaminación con VTEC (2% y 10%, respectivamente). Al analizar la contaminación EPEC vs. VTEC se obtuvieron diferencias teniendo en cuenta el tipo de producto y de comercio de donde se obtuvieron las muestras. En carcasas y menudos, no hubo diferencias en los porcentajes de contaminación teniendo en cuenta el tipo de comercio pero en hamburguesas, la contaminación con VTEC predominó en carnicerías mientras que EPEC predominó en comercios avícolas. Los aislamientos caracterizados a partir de las muestras VTEC positivas fueron eae-negativos y presentaron diferentes perfiles genotípicos siendo vt2 el predominante. Se detectaron varios serotipos de VTEC, entre ellos: O91:H14, O113:H21, O130:H11 y O178:H19 los cuales también han sido aislados también de pacientes humanos con diarrea, CH o SUH, como así también de bovinos en nuestra región. No se detectaron aislamientos del serotipo VTEC O157:H7. La mayoría de los aislamientos presentó variantes de vt asociadas a casos de SUH como vt1EDL933, vt2vhb y vt2EDL933. La variante vt2f no se detectó en ninguna de las muestras. Todos los aislamientos EPEC caracterizados en este trabajo de Tesis fueron atípicos, es decir carecían del gen bfpA. Aunque el serotipo EPEC O40:H10 fue el predominante, se obtuvo una amplia variedad de serotipos, muchos de los cuales han sido aislados también de otras especies animales y de niños con diarrea. La mayoría de los aislamientos EPEC presentaron la variante β de la intimina y sólo uno portaba la variante γ y correspondió al serotipo ONT:H40. En la planta de faena no se detectó VTEC en ninguno de los muestreos, mientras que la contaminación con EPEC aumentó y se mantuvo en las diferentes etapas del proceso de faena principalmente en el 2° y 3° muestreo. Algunos serotipos como O2:H40 y O123:H32 se observaron tanto en aislamientos de carcasas evisceradas sin lavar como en carcasas lavadas. En el 3° muestreo se encontró el mismo serotipo (O108:H9) en el aislamiento del agua de un chiller y de la superficie externa de una carcasa lista para envasar. La aplicación del método MLVA (Multilocus Variable Number of Tandem Repeat Analysis) permitió relacionar aislamientos de VTEC no-O157 (O113:H21 y O130:H11) y EPEC (O2:H40, O40:H10 y O108:H9) de diferentes orígenes, mostrando diversidad genética entre los mismos. Este trabajo de Tesis demuestra que el pollo es reservorio de EPEC y que la contaminación con este patotipo en los productos derivados se mantiene en una importante proporción. Sin embargo, VTEC se aisló sólo de una muestra de cloaca de un total de 859, sugiriendo que el pollo no es reservorio de este patotipo y que la presencia de VTEC en los productos derivados podría deberse a contaminación cruzada. Esto se observó principalmente en las hamburguesas de las carnicerías, reforzando la idea de la contaminación cruzada con carne de origen bovino. El aislamiento de serotipos VTEC y EPEC que han sido aislados previamente de bovinos y niños con diarrea, así también como los diferentes perfiles de virulencia encontrados y las variantes identificadas permiten inferir el potencial riesgo que representan estas cepas para la salud humana. Los resultados sugieren que es necesario incrementar las medidas de higiene en cada una de las etapas del proceso de faena y de elaboración de los productos avícolas, tendientes a reducir la contaminación con EPEC y VTEC, para de esa manera brindar productos finales seguros para los consumidores.
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Palabras Clave
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