DETECCION, PURIFICACION BIODIRIGIDA Y ANALISIS ESTRUCTURAL DE METABOLITOS BIOACTIVOS DE ORIGEN VEGETAL

Tesis

Resumen *

Tres especies vegetales autóctonas de Argentina, Caesalpinia paraguariensis (D. Parodi) Burkart (Fabaceae), Cestrum parqui L’Hér. (Solaneaceae), Verbascum virgatum Stokes (Escrofulariaceae), fueron seleccionadas a partir de un relevamiento etnomedicinal y fitoquímico desarrollado de acuerdo con la propiedad medicinal vulneraria, por la que su consumo está difundido en el norte de nuestro país. Las formas extractivas popularmente empleadas (infusión, cocimiento y tintura) se investigaron para evaluar sus actividades antimicrobianas (AM) sobre cepas bacterianas Gram positivas y Gram negativas, aisladas de heridas cutáneas y algunas obtenidas de colecciones de referencia internacional, y también se ensayaron especies bacterianas y fúngicas fitopatógenas. Las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) y concentraciones bactericidas mínimas (CBM) se determinaron por métodos de dilución y difusión. La actividad antioxidante (AO), se investigó de acuerdo a la capacidad de neutralizar radicales libres, inhibir la peroxidación lipídica inducida sobre membranas biológicas y de ejercer actividad depuradora de radicales libres a nivel intracelular. La actividad antiinflamatoria (AI) se probó determinando actividad inhibitoria sobre enzimas claves en procesos inflamatorios, hialuronidasa y óxido nítrico sintasa inducible). Además, se estudió la toxicidad de los extractos, determinando concentración letal 50 % (DL50) y genotoxicidad (a dosis bajas). Los resultados obtenidos se compararon con los correspondientes a sustancias estándares de actividad conocida reconocida, permitiendo evaluar la eficacia de los extractos. A partir de dicha evaluación se seleccionó el extracto con bioactividad más relevante (AM, AO y AI) y ausencia de toxicidad para el aislamiento de la/s molécula/s responsable/s de las actividades biológicas evidenciadas. A partir de la infusión de ritidoma de C. paraguariensis, aplicando métodos de fraccionamiento, filtración, evaporación al vacío (destilación y liofilización) y cromatográficos, entre otros, se lograron aislar: ácido gálico (1: Acido 3,4,5-trihidroxibenzoico), ácido elágico (2: 2,3,7,8 tetrahidroxi (1) benzopirano [5,4,3- cde] (1)benzopiran-5,10-diona) y tres derivados de ác. elágico: ácido 3,3’-di-O-metilelágico 4-O-β-D-xilopiranósido (3), ácido 3-O-metilelágico (4), ácido 3,3' di-O-metilelágico (5). Estos compuestos fueron identificados desde el punto de vista estructural por métodos químico-cromatográficos y espectroscópicos, y fueron confirmados como constituyentes responsables de las bioactividades investigadas realizando ensayos con los compuestos puros. Los compuestos 2, 4 y 5 presentaron actividad AM más potente, aunque todos fueron bioactivos; todos exhibieron capacidad depuradora de radicales libres, 1, 2, 3 y 4 inhibieron la peroxidación lipídica, 4 y 5 demostraron actividad AO a nivel intracelular; ac. elágico (2) y sus derivados metilados (4 y 5) exhibieron actividad antiinflamatoria más intensa que el derivado glicosilado (3). Los compuestos no evidenciaron toxicidad por los métodos ensayados. Estos hallazgos posibilitan la validación del uso popular de la corteza de C. paraguariensis como vulneraria, y conforman el primer estudio fitoquímico-biológico formal basado en datos etnomedicinales para esta especie vegetal. Información suministrada por el agente en SIGEVA