"Regulación por fármacos de la expresión de proteínas transportadoras de membrana plasmática en hígado de rata"

Tesis

Resumen *

El transporte vectorial de sustancias es una función importante de las células polarizadas. En el hepatocito, las proteínas de membrana que median el transporte dependiente de ATP hacia bilis de sales biliares (SB) y aniones orgánicos conjugados pertenecen a la superfamilia de transportadores ATP binding cassette (ABC); entre ellas Bsep y Mrp2, respectivamente. La expresión y actividad de las mismas puede ser modulada por diversas drogas. Espironolactona (SL) es un diurético ampliamente usado en pacientes con edema o ascitis que además produce un aumento del flujo biliar (FB) total en la rata y posee propiedades de inductor enzimático. En una primera etapa de este trabajo de Tesis se estudió el efecto de SL sobre la expresión y actividad de los transportadores canaliculares Bsep y Mrp2 y su implicancia en la coleresis inducida por el esteroide en ratas. Se observó que, a pesar de disminuir el FBDSB (sin modificaciones significativas en Bsep), SL produjo un incremento del FB total al aumentar la fracción independiente de SB como resultado de la inducción de la expresión y la actividad de Mrp2. En consecuencia, en una segunda etapa, se decidió evaluar el posible efecto beneficioso de SL para contrarrestar cuadros de colestasis hepatocelular donde, tanto la expresión como actividad de Mrp2 se encuentren disminuidas, como es el caso de la colestasis inducida por etinilestradiol (EE). Se co-trataron ratas con SL y EE y se estudió la expresión génica y proteica de los transportadores de membrana canalicular y la función secretora biliar. Además, al observar que EE produce una inducción de Mrp3 (proteína transportadora de aniones orgánicos localizada en la membrana basolateral), se evaluó el manejo de un sustrato común de Mrp2 y Mrp3: el glucurónido de paracetamol (Glu-P), en el modelo de hígado aislado y perfundido (HAP). Así, se demostró que SL contrarresta las alteraciones en la formación del FB inducidas por EE al aumentar la expresión de Mrp2 (ARNm y proteína), lo que se asoció a un aumento en la excreción biliar de glutation. Sin embargo, el aumento en la expresión de Mrp2 en el grupo co-tratado co-existió con un aumento en la expresión de Mrp3, inducida por el estrógeno colestásico. Esto llevó a una prevención sólo parcial del deterioro de la secreción biliar de sustratos comunes de Mrps inducido por EE, ya que se estableció una competencia para la excreción preferencial de los mismos entre Mrp2 apical y Mrp3 basolateral. Experimentos adicionales realizados tanto in vivo como en cultivo primario de hepatocitos sugieren que EE ejercería una acción directa sobre el gen de Mrp3 posiblemente a través de un receptor nuclear aún no identificado. Finalmente, SL no sólo produjo inducción de Mrp2 sino también del receptor nuclear PXR, considerado mediador de sus efectos sobre los sistemas enzimáticos de biotransformación y proteínas transportadoras. Información suministrada por el agente en SIGEVA