DISEÑO Y CONSTRUCCIÓN DE VECTORES DE TRANSFERENCIA PARA LA OBTENCIÓN DE VIRUS VACCINIA ANKARA MODIFICADO (MVA) RECOMBINANTES.

Articulo

Resumen *

El virus vaccinia Ankara modificado (MVA) constituye un buen candidato para el desarrollo de vectores virales de expresión no replicativos porque no replica en la mayoría de la células de mamíferos. Para la producción de MVA recombinantes es esencial disponer de vectores de transferencia que, por recombinación homóloga con el genoma viral, permitan introducir los genes de interés en regiones no esenciales para la replicación in vitro. En este trabajo se diseñaron y obtuvieron los vectores de transferencia VT-MHA y VT-MTK que portan regiones que corresponden a las posiciones 1-303 y 608-948 del gen MVA165R (ha) y 1-244 y 325-534 del gen MVA086R (tk), respectivamente, flanqueando un sitio de clonado múltiple para la inserción de los genes foráneos. En dichos vectores se clonaron los cassettes para la expresión del gen lac Z o uid A, y la actividad de las enzimas marcadoras B-galactosidasa y B-glucuronidasa se confirmó in situ. Además, utilizando el VT-MTK-GUS se obtuvieron y aislaron MVA recombinantes puros que portan y expresan el gen uid A. Los resultados obtenidos constituyen las herramientas básicas para establecer la metodología de obtención de MVA recombinantes con el propósito de desarrollar vectores virales no replicativos candidatos a vacunas. Información suministrada por el agente en SIGEVA