Producción CyT
Congreso
Autoría
Alcalde Myriam
;
PUNTARULO, SUSANA ANGELA
;
Galleano Monica
Fecha
2004
Editorial y Lugar de Edición
Fundación Revista Medicina
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto del tratamiento in vitro con peroxinitrito sobre la ferritina y las posibles alteraciones funcionales consecuentes. Apoferritina purificada de bazo de caballo fue expuesta a linsidomina (SIN-1; en el rango 0-500 uM) por incubación en buffer fosfato de potasio 100 mM, pH 7,4, bicarbonato 25 mM a 37ºC por períodos de hasta 60 min. La fluorescencia asociada a triptofano (lexc=285 nm; lem=345 nm) decreció significativament...
El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto del tratamiento in vitro con peroxinitrito sobre la ferritina y las posibles alteraciones funcionales consecuentes. Apoferritina purificada de bazo de caballo fue expuesta a linsidomina (SIN-1; en el rango 0-500 uM) por incubación en buffer fosfato de potasio 100 mM, pH 7,4, bicarbonato 25 mM a 37ºC por períodos de hasta 60 min. La fluorescencia asociada a triptofano (lexc=285 nm; lem=345 nm) decreció significativamente por efecto de la incubación en forma dosis dependiente (-22±4 y -35±2% a los 15 min de exposición a 30 y 100 uM SIN-1, respectivamente). La fluorescencia adscripta a la formación de bitirosinas (lexc=325 nm; lem=405 nm) no fue afectada significativamente por los tratamientos. El contenido de cisteína (estudiado por resonancia paramagnética electrónica -EPR-) disminuyó significativamente (45±5%) al cabo de 15 min de incubación con 100 uM SIN-1. La actividad de ferroxidasa de la apoferritina, estudiada espectrofotométricamente, resultó de 18±2 uM Fe(II)/min.uM ferritina y 9,2±0,9 uM Fe(II)/min.uM ferritina para la proteína control y expuesta a SIN-1 100 uM durante 30 min, respectivamente. La producción de radicales proteicos derivados de la ferritina fue monitoreada por EPR a 77 K analizando la cinética de formación entre 0 y 30 min de exposición a 100 uM de SIN-1. Se detectó la presencia de al menos una especie radical, cuya concentración se incrementó en función del tiempo de incubación y con características compatibles con un radical centrado en triptofano. Los resultados sugieren que una elevada concentración en estado estacionario de peroxinitrito conduce a daño en la estructura proteica de la ferritina con posibles alteraciones en la funcionalidad. Estudios posteriores serán necesarios para evaluar la relevancia pato-fisiológica del fenómeno observado.Este trabajo fue financiado por la ANPCYT, la Universidad de Buenos Aires y el CONICET.
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Palabras Clave
EPRSIN-1ferritinaradical centrado en triptofano