Producción CyT
InVet - Desarrollo de marcadores genómicos Single Tandem Repeats (STR) para el estudio de la diversidad y diferenciación de poblaciones de Nosema ceranae
Congreso
Autoría:
Lannutti, L ; Saborit, JI ; Leenen, A ; Basualdo, M ; Rodriguez, G ; Gisder, S ; Genersch, E ; Florin-Christensen, M ; Schnittger, LFecha:
2024Editorial y Lugar de Edición:
Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad de Buenos AiresISSN:
1514-6634Resumen *
El microsporidio Nosema ceranae es un parásito intracelular obligado que infecta a las abejasmelíferas. Se ha observado un aumento de la prevalencia en las colmenas de esta especieinvasora en los últimos 20 años, junto con la sustitución de su especie hermana, N. apis. Estaobservación ha generado interés en averiguar el impacto de N. ceranae en la salud de lascolmenas, así como la diversidad y diferenciación de sus poblaciones. Existen muchasestrategias para la tipificación molecular, pero sólo los métodos codominantes, como el análisisde short tandem repeats (STR), son adecuados para captar la diversidad intra-muestral. Sediseñaron 112 pares de primers para que hibridicen con regiones flanqueantes de STRs, en basea los genomas disponibles. Los primers se analizaron in silico, mediante la herramienta Primer-BLAST, dejando sólo los específicos para N. ceranae (89 de 112). Los primers seleccionadosfueron testeados por PCR, utilizando ADN de N. ceranae de diferentes regiones geográficas,seguido de electroforesis en geles de agarosa de alta resolución y posteriormente analizadospor electroforesis capilar. Se analizaron los patrones de bandas generados, considerando trescriterios principales: (i) generación de amplicones de diferentes tamaños por muestra, para undeterminado STR (detección de polimorfismo intra-muestral); (ii) diferencias en el tamaño delos amplicones entre muestras (detección de polimorfismo inter-muestral); (iii) consistenciaentre tres réplicas de amplificación de la misma muestra (fidelidad del marcador STR). En basede estos criterios, se seleccionaron 6 STRs de entre los 112 analizados como adecuados paraser usados como marcadores moleculares. Se optimizó la temperatura de hibridación y sedeterminó la sensibilidad de detección de cada PCR. También se secuenciaron los ampliconesgenerados de diversas muestras para verificar su identidad. La aplicación de los marcadores amuestras de ADN genómico aislado de abejas positivas para N. ceranae por microscopia,proviniendo de otras regiones del mundo está en curso. Resultados preliminares sugieren queeste set de STR puede diferenciar entre poblaciones de N. ceranae geográficamente distantesy/o de diferentes apiarios. Información suministrada por el agente en SIGEVAPalabras Clave
Single Tandem RepeatsMarcadores genómicosNosema ceranae