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InVET - Recuperación en membrana corion-alantoidea (MCA) de tejido testicular criopreservado de Gallus gallus domesticus
Congreso
Fecha:
2024Editorial y Lugar de Edición:
UBAResumen *
El modelo de MCA es una herramienta útil para estudiar la viabilidad a corto plazo y la vascularización del tejido testicular criopreservado post-implantación. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la arquitectura testicular pre y post criopreservación de Gallus gallus domesticus en MCA. De cada polluelo de 15 días post eclosión se extrajeron 3 muestras, una se utilizó previamente como tejido control sin ningún procedimiento y se fijó en formol bufferado al 10% para su posterior procesamiento histológico. A las otras 2 muestras se les aplicó el protocolo de vitrificación. Posterior al atemperado, una muestra quedó como tejido control de la vitrificación y la tercera muestra fue implantada en la MCA. La solución de vitrificación usada consistió en medio base MEM/Glutamax 1 suplementado con 25 mg/mL de seroalbúmina bovina con el agregado de Dimetilsulfóxido (DMSO) 2,8 mol/L y Ethilenglycol 2,8 mol/L como crioprotectores. Se deshidrató por pasajes crecientes en solución de vitrificación (25% 50 % y 100% en hielo). Luego se transfirieron las piezas a crioviales y se almacenaron en nitrógeno líquido por 48 h. Se utilizaron huevos embrionados de gallinas raza Leghorn incubados a 37°C y 60% de humedad. Al día tres de incubación a los huevos embrionados se les practicó una ventana de 1 x 1,5 cm en la cáscara y se extrajo 2 cm3 de albúmina por punción con una aguja 21G. A los 8 días de incubación se le practicó el método del injerto en la membrana corioalantoidea en donde explantos de tejido testicular atemperados se colocaron directamente sobre una MCA previamente traumatizada. Los huevos se mantuvieron en incubación por 5 días y posteriormente fueron evaluados. Las muestras tanto de tejido control como de tejido testicular post vitrificado correspondiente a cada estadio de desarrollo analizado y de tejido injertado después de 5 días de incubación se fijaron en formol bufferado al 10 % y mediante la técnica histológica convencional se obtuvieron cortes de 5 μm de espesor de cada uno de los tejidos muestreados, en dichos preparados se evaluó la estructura y morfología testicular en donde se analizarán 2 campos por muestras a 400 aumentos. Las imágenes fueron capturadas usando un microscopio Optika Italy-B-290 con una cámara incorporada. Todos los testículos injertados en los embriones de pollo que sobrevivieron estaban sostenidos por la MCA y tenían un suministro de sangre evidente. No se observaron diferencias en la mortalidad de los embriones huéspedes entre los tratamientos (embriones sin explantos y embriones con explantos) dado que la supervivencia de los mismos fue del 100%. En comparación con el tejido testicular tratado en MCA y los controles, el cambio en el desarrollo espermatogénico y en los túbulos seminíferos del injerto bien vascularizado es similar al desarrollo testicular normal, sin embargo se observan cambios en cuanto a la arquitectura testicular. Información suministrada por el agente en SIGEVAPalabras Clave
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