Producción CyT
Congreso
Autoría
BARONTINI, JAVIER MIGUEL
;
MORALES A.
;
Guzman E.
;
Garcia Lampasona S
Fecha
2024
Editorial y Lugar de Edición
AAF
ISSN
978-987-24373-6-7
Resumen
Información suministrada por el agente en
SIGEVA
El ajo (Allium sativum L.) es un cultivo de importancia mundial. La plantación comienza con bulbillos posiblemente infectados por Onion yellow dwarf virus (OYDV), Leek yellow stripe virus (LYSV), Shallot latent virus (SLV), Garlic common latent virus (GCLV) y Garlic virus A - E y X (GarV) que disminuyen el rendimiento. Como los métodos de extracción de ARN y detección viral plantean desafíos en tiempo empleado y sensibilidad, se ajustaron protocolos para la de...
El ajo (Allium sativum L.) es un cultivo de importancia mundial. La plantación comienza con bulbillos posiblemente infectados por Onion yellow dwarf virus (OYDV), Leek yellow stripe virus (LYSV), Shallot latent virus (SLV), Garlic common latent virus (GCLV) y Garlic virus A - E y X (GarV) que disminuyen el rendimiento. Como los métodos de extracción de ARN y detección viral plantean desafíos en tiempo empleado y sensibilidad, se ajustaron protocolos para la detección de virus en hojas y bulbillos de ajo. Se brotaron bulbillos, se tomó una porción de hoja y se evaluaron los métodos de extracción TRIzol-reagent®, kit Spectrum™ Plant Total RNA y CTAB (los dos últimos previa molienda en N2 líquido). En la extracción a partir de bulbillos, se tomó la hoja de brotación, se molió con tampón Sorbitol y se prosiguió con TRIzol-reagent®. El ARN obtenido se trató con DNasas, con inhibidor de ribonucleasas y se sintetizó el cADN. Se realizaron RT-PCRs para expresar el gen actina y con iniciadores para cada virus. Los productos de RT-PCR se revelaron por electroforesis en gel de agarosa 1,3 % y se corroboraron por amplificación de banda de 194 pb para actina, 185 pb para GarV, 290 pb para OYDV, 191 pb para LYSV, 170 pb para SLV y 481 pb para GCLV. TRIzolreagent® y kit comercial Spectrum™ emplearon menor tiempo en la obtención del ARN, siendo efectiva la extracción desde bulbillos. La RT-PCR identificó la presencia de los virus a través de la amplificación de la banda de tamaño esperado, ajustándose las diferentes técnicas de extracción de ARN y RT-PCR.
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Palabras Clave
AJOVIRUSPCRDIAGNÓSTICO