La ADN polimerasa aislada de Thermus aquaticus (Taq ADN polimerasa) es una enzimatermoestable utilizada en casi el noventa por ciento de los laboratorios de biología molecular en elprocedimiento de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) que permite la síntesis de ácidodesoxirribonucleico (ADN) in vitro. Esta enzima en particular, es empleada en el instituto IFIBIO demanera cotidiana para análisis de genotipificación y diagnóstico de contaminación de micoplasmaen cultivos celulares.Nuestro laboratorio cuenta con un clon de Escherichia coli (E. coli) transformado con un plásmidoque contiene el gen Taq ADN polimerasa. Dado el costo de esta proteína altamente usada es elobjetivo de este informe describir la producción de Taq ADN polimerasa funcional expresada en unacepa de E. coli mediante un método confiable, práctico, sencillo y de bajo costo.En trabajos anteriores este grupo logró obtener un extracto celular que contiene la Taq ADNpolimerasa. Para que la enzima amplifique correctamente es necesario aportar a la mezcla dereacción la cantidad óptima de su cofactor y otros componentes más. Para ello desarrollamos dosmezclas que denominamos buffer A y B que se utilizan en la reacción de PCR.Objetivo1- Probar la actividad del producto Taq polimerasa llamado M1 (ver Info N°2) a través de larealización de una PCR para amplificar un gen de interleuquina de una biopsia de ratón.2- Evaluar la efectividad del buffer A y B para el funcionamiento de la enzima.Información suministrada por el agente en SIGEVA
Producción CyT