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Hematologia Argentina - Modulación de BNIP3 citoplasmático y nuclear durante la inducción de muerte celular por AsNaO2 y MG132 en células leucémicas mieloides
Congreso
Autoría:
Cavaliere V ; Lombardo T ; Anaya L ; Costantino S ; Alvarez E ; BLANCO, GUILLERMO ARMANDO C.Fecha:
2011Editorial y Lugar de Edición:
Sociedad Argentina de HematologíaResumen *
Modulación de BNIP3 citoplasmático y nuclear durante la inducción de muerte celular por arsenito de sodio (AsNaO2), MG132 y azacitidina en células leucémicas mieloides Cavaliere V., Lombardo T., Anaya L., Costantino S., Alvarez E., Blanco G. LAITO-IDEHU CONICET, Hospital de Clínicas, UBA; Servicio de Hematología, Hospital de Clínicas, UBA; LIT-IDEHU CONICET Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA BNIP3 es una proteína miembro de la familia Bcl-2 que induce muerte programada en algunos tumores por medio de su inserción en la membrana mitocondrial. Su localización nuclear, descripta en algunas neoplasias, se asocia a formas agresivas y resistentes a la quimioterapia. Objetivo: Evaluar la expresión basal y modulación de BNIP3, a nivel de proteína (BNIP3p) y ARNm (BNIP3m), en células leucémicas luego de inducir la muerte celular por tratamiento individual y combinado con NaAsO2 y el inhibidor de proteasoma MG132, y con el hipomentilante azacitidina como monodroga. Material y Métodos: El efecto citotóxico se estudió exponiendo las células en cultivo durante 72hs en un rango de 7 dosis, con posterior tinción con ioduro de propidio y fluoresceína diacetato y evaluación por citometría de flujo. Se determinó el efecto citotóxico 90% (EC90) sobre cada línea celular (U937,leucemia promonocítica; K562, LMC y Raji, linfoma de Burkitt) y se expusieron las células a esta dosis durante 24h para luego obtener fracciones proteicas nucleares y citoplasmáticas por separado. La expresión y localización subcelular se determinó por western blot con anticuerpo monoclonal contra BNIP3. La expresión de BNIP3m se determinó por RT-PCR. Resultados: El BNIP3m fue detectable en U937 y K562 pero la línea Raji mostró niveles más bajos. Los tratamientos con EC90 no modificaron la expresión de BNIP3m en ningún caso pero sí el tratamiento con 5mM azacitidina durante 24hs que aumentó sensiblemente su expresión. El BNIP3p basal fue detectado en las tres líneas pero sólo en la fracción nuclear. Con los tratamientos se observó la presencia de BNIP3p en la fracción citoplásmica y la desaparición en la fracción nuclear en células K562 y U937. En cambio, las células Raji no mostraron cambios en la expresión de BNIP3p nuclear con los tratamientos. Conclusiones: El BNIP3 tendría un rol en la inducción de muerte por tratamiento con AsNaO2 y MG132 en células leucémicas mieloides U937 y K562 pero no en células Raji. La falta de participación de BNIP3 en la inducción de muerte en células Raji se debería al silenciamiento epigenético reversible por el hipometilante. Información suministrada por el agente en SIGEVAPalabras Clave
azacitidinaBNIP3MG132arsenico