Producción CyT
IMEMA 2023 - Estudio del gen CYP51 de Sporothrix schenckii sensu stricto.
Congreso
Autoría:
Barbagelata, María Sol ; Sasoni, Natalia ; Ducret, Karen ; Gamarra, Soledad ; GARCIA, GUILLERMO MANUELFecha:
2022Editorial y Lugar de Edición:
Asociación Argentina de MicrobiologíaResumen *
Antecedentes y objetivosLa esporotricosis es una micosis crónica causada por especies dimórficas del complejo Sporothrix schenkii. La infección se trata principalmente con itraconazol. La emergencia de resistencia a los antifúngicos hace necesario el estudio de los blancos de los mismos. Los azóles actúan inhibiendo la 14-esterol demetilasa (ERG11p/CYP51p). El objetivo de este trabajo fue estudiar el CYP51p de Sporothrix schenckii sensu stricto y correlacionarlos con sus perfiles de sensibilidad a distintos antifúngicos.Materiales y métodosSe utilizaron 3 aislamientos clínicos humanos provenientes de Medellín (Colombia) identificados molecularmente. La secuencia del CYP51 de Sporothrix schenckii (SsCYP51) se obtuvo del genoma publicado (GCA_000961545.1) utilizando el gen CYP51A de A. fumigatus (AF338659) como secuencia base. En base al SsCYP51 hipotético se diseñaron los cebadores específicos para la obtención de secuencias del gen. Los productos de PCR se secuenciaron, se identificaron los intrones, se buscaron mutaciones, se tradujeron a proteínas y se construyeron árboles filogenéticos. Se determinó el perfil de sensibilidad por microdilución utilizando la fase levaduriforme siguiendo el protocolo M27 4ta-ed de CLSI. Se establecieron las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) para Anfotericina B, Anidulafungina, Caspofungina, Fluconazol, Isavuconazol, Itraconazol, Posaconazol y Voriconazol.ResultadosLas secuencias obtenidas permitieron certificar que la secuencia SsCYP51 putativa era efectivamente un integrante de la familia CYP51. El análisis comparativo detectó cambios de aminoácidos asociados a resistencia a azoles en A. fumigatus (en los residuos L98, G138 y M220). En SsCYP51p, el residuo equivalente a la posición 301 de A. fumigatus era una treonina, que es característico de CYP51/ERG11 sensibles a fluconazol (por ej. Candida spp. o CYP51B de A. fumigatus). Llamativamente, los aislamientos estudiados son resistentes a Fluconazol y solo portan un CYP51p. Filogenéticamente, esta proteína se agrupó próxima a los CYP51B de hongos filamentosos. El resultado de la CIM permitió calificar a los aislamientos estudiados como Wild Type (debajo del Valor de Corte Epidemiológico publicado).ConclusionesEn base a los valores de CIM se definieron estos aislamientos como WT. Esto permite evidenciar q la secuencia de SsCYP51 descripta es un miembro de la familia CYP51B/ERG11 (forma evolutiva más primitiva). A pesar de esto, la resistencia a fluconazol estaría relacionada a un mecanismo aún no descripto. Información suministrada por el agente en SIGEVAPalabras Clave
SEQUENCECYP51SPOROTRIXANALYSIS