Análisis estructural y funcional del Receptor de Glucocorticoides en sus múltiples interacciones

Tesis

Resumen *

En esta Tesis se exploran los mecanismos moleculares involucrados en la interacción entre el receptor de glucocorticoides (GR), un factor de transcripción activado por ligando, y varios de los interactores que participan en su actividad transcripcional. En primer lugar, se emplearon métodos computacionales (simulación por dinámica molecular) para descifrar los mecanismos de acción del agonismo y del antagonismo en el dominio de unión al ligando utilizando los compuestos comerciales dexametasona (glucocorticoide) y mifepristona (antiglucocorticoide), caracterizando el comportamiento dinámico de la hélice 12 del receptor y su relación con la identidad del ligando. En segundo lugar, se investigó la interacción del GR con correguladores de la transcripción mediante el uso de tecnología de microarrays, dirigido a evaluar afinidades de unión GR-corregulador en presencia de diferentes ligandos. Aplicando métodos de docking péptido-proteína también se analizaron los determinantes moleculares involucrados en este reconocimiento. En tercer y último lugar, se abordó el estudio de la interacción cruzada entre el GR y el receptor de progesterona (PR), factor de transcripción de la misma familia proteica. Empleando ensayos de genes reporteros, se evaluó la actividad transcripcional al activar cada receptor por separado o ambos a la vez, y se comprobó la interferencia funcional GR/PR. Luego, mediante microscopía de fluorescencia de alta resolución en células vivas, se estudió y corroboró la capacidad de ambos receptores de formar parte de un mismo complejo. Asimismo, se caracterizó el estado de oligomerización del GR en presencia de PR, observando también interferencia en este caso. En conjunto, estos resultados refuerzan la idea de que PR y GR podrían formar heterocomplejos. Finalmente, se realizó un estudio in silico del hipotético heterecomplejo mediante simulaciones por dinámica molecular de homo- y heterodímeros de los dominios de unión al ADN de PR y GR, corroborando su estabilidad estructural e identificando factores que podrían explicar su menor actividad transcripcional. El conjunto de los resultados obtenidos en esta Tesis permiten ampliar los conocimientos existentes sobre la estructura y función del receptor de glucocorticoides en diferentes contextos y en relación a los múltiples interactores que regulan su actividad: ligandos, correguladores y otros factores de transcripción y contribuyen a la comprensión de los mecanismos moleculares que subyacen a las acciones fisiológicas y farmacológicas de los GC. Información suministrada por el agente en SIGEVA