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Comunidad CONICET

ANTONELLI, CRISTIAN JAVIER

PROFESIONAL ASISTENTE

Tema:

Las tareas de investigación del periodo del año 2024 se llevarán a cabo en el Instituto de Biología Molecular y Celular de Plantas (IBMCP) de la Universidad Politécnica de Valencia (UPV) y del Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC), en Valencia, España. Se profundizarán las investigaciones iniciadas en el periodo de beca externa obtenida en 2023, pero este periodo de estadía será bajo el régimen de Licencia Art. 18 - H - Razones Fundadas Sin Goce. El objetivo general del laboratorio dirigido por el Dr. Pablo Vera, en el cual realizaré las tareas, está vinculado al estudio de las células laticíferas de la especie de interés agronómico y científico Euphorbia lathyris a distintos niveles de complejidad: nivel molecular, celular, de tejido, de planta entera y de su fisiología frente a estreses. Con este tema como ?hilo conductor? se realizarán investigaciones para poner a prueba hipótesis vinculadas a la génesis de las células laticíferas y a la síntesis de los triterpenos contenidos en alta proporción en su látex: - Silenciamiento de genes de E. lathyris a través de la técnica de silenciamiento genético inducido por virus (VIGS por sus siglas en inglés). Esta técnica es la que corrientemente se utiliza en este laboratorio porque es una especie actualmente recalcitrante a la transformación estable por otros métodos de transgénesis. Esta técnica se realizará desde la etapa de cultivo de Agrobacterium tumefaciens transformadas con los vectores de interés para silenciar genes específicos; magnificación de los vectores en una especie intermedia mediante agroinfiltración (sobre Nicotiana benthamiana); extracción de los vectores multiplicados en N. benthamiana y posterior inoculación sobre la especie de interés E. lathyris; observación y evaluación de fenotipos logrados con las comprobaciones moleculares correspondientes (extracción de ARN y cuantificación relativa de los genes a través de RT-qPCR). Los genes candidatos se seleccionarán por medio del análisis de múltiples transcriptomas realizados previamente en el grupo de investigación del Dr. Pablo Vera. - Cultivo in vitro de plantas. Obtención de callos de E. lathyris para el estudio de diferentes técnicas de transformación, con el objetivo de lograr transformaciones estables en esta especie, y posterior embriogénesis y obtención de explantes. - Experimentos con aplicación de fitohormonas sobre E. lathyris. Se aplicarán por aspersión y/o por riego distintas fitohormonas que se hipotetizan están vinculadas a la génesis y crecimiento de las células laticíferas en tejidos foliares. También se utilizarán diversos inhibidores de las fitohormonas en dichos experimentos. - Obtención de plantas transgénicas de la especie modelo Arabidopsis thaliana a través de la técnica Floral Dip. Se realizarán las tareas correspondientes a todos los pasos de dicha técnica: cultivo y preparación de colonias competentes de bacterias A. tumefaciens (cepa C58), electroporación de las bacterias para la incorporación por parte de las mismas de los plásmidos con los transgenes de interés; selección y multiplicación de las bacterias transformadas mediante resistencia a antibióticos; cultivo y preparación de las plantas de Arabidopsis que serán transformadas durante la floración mediante sumersión de las mismas en un medio de cultivo con las bacterias previamente transformadas; selección de las semillas exitosamente transformadas utilizando lupa de fluorescencia con el filtro DSRed (esto es posible debido a que las semillas transformadas llevarán el gen marcador DSRed); posterior cultivo, genotipado y evaluaciones de las plantas transformadas. - Microscopía electrónica de barrido (SEM por sus siglas en inglés). Se realizarán observaciones de tejidos foliares de distintos mutantes de E. lathyris (mutantes con bajo desarrallo de células laticíferas y con elevado desarrollo de las mismas) para estudiar la distribución de las células laticíferas en los distintos tejidos de la hoja (en el parénquima en empalizada, en el parénquima lagunar, en cercanía de los haces vasculares y en proximidad de las células epidérmicas). - Tareas generales y de rutina de microscopía óptica: fijación de muestras con FAA (formaldehído, alcohol, ácido acético); posteriores tinciones con colorantes diversos (tinción de triterpenos de células laticíferas de E. lathyris mediante Sudan Black B, tinción de alcaloides de mediante cloruro férrico, tinción de diferentes tejidos vegetales con azul de toluidina, safranina, DAPI, etc.); observación y obtención de imágenes con diferentes microscopios (ópticos, de fluorescencia, confocal); análisis y evaluación de las imágenes mediante software FIJI de ImageJ; obtención de índices y análisis estadísticos de los mismos. - Cuantificación y clasificación de triterpenos mediante técnicas de rutina en el laboratorio (espectrofotometría, TLC, HPLC, etc.). - Diversas tareas de rutina vinculadas principalmente a biología molecular y cuantificación de metabolitos secundarios.

Lugar de Trabajo

INSTITUTO DE FISIOLOGIA VEGETAL (INFIVE, CONICET-UNLP) Depende de
Dirección:
DIAGONAL 113 ESQUINA 61 S/N, 1900 - La Plata - Buenos Aires - Argentina

Contacto:

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Experticia en CyT*

Doctorado en la Escuela para Graduados Alberto Soriano de la Facultad de Agronomía de la Universidad de Buenos Aires. Procesamiento y obtención de muestras vegetales a nivel de estudios fisilógicos, morfológicos, anatómicos y moleculares. Diseño y realización de ensayos con plantas en cámaras de cultivos, en invernadero y en parcelas de campo (manejo de agroquímicos, preparado de soluciones de riego, etc). Procesamiento de muestras: determinación de iones (Na, Cl, K, Ca) mediante espectrofotómetro, determinación de N por metodología Kjeldahl, medición de taninos condensados. Manejo de instrumental y equipos de laboratorio en general: Nanodrop, termocicladores, qPCR Real Time, espectrofotómetros, pipetas, buretas, autoclaves. Análisis estadísticos de datos. Manejo de diversas herramientas de análisis por computadora (planillas, procesadores de imágenes, analizadores de expresión de genes, diseño de primers). *Información suministrada por el agente en SIGEVA

Líneas de Investigación

Ensayos de tolerancia a estreses abióticos CIENCIAS AGRÍCOLAS - Agricultura, Silvicultura y Pesca - Agricultura
Mejoramiento de especies forrajeras CIENCIAS AGRÍCOLAS - Biotecnología Agropecuaria - Biotecnología Agrícola y Biotecnología Alimentaria

Capacidades Tecnológicas

  • 6. Ciencias biológicas
    • 2. Biología / Biotecnología
      • 2.3. Ingeniería genética
      • 2.2. Biología celular y molecular
      • 2.5. Microbiología
      • 2.4. Ensayos in vitro, experimentos
    • 3. Investigación del genoma
      • 3.2. Expresión genética, investigación proteómica
  • 7. Agricultura y recursos marinos
    • 1. Agricultura
      • 1.2. Ganadería / labranza
  • 10. Protección del hombre y del medio ambiente
    • 2. Medio ambiente
      • 2.9. Reducción del cambio climático

Palabras Clave

ESTADISTICASTATISTICSBREEDINGESTRESESFITOMEJORAMIENTOSTRESSESLOTUS

Formación Académica

2012 - 2017

Doctor de la Universidad de Buenos Aires

FACULTAD DE AGRONOMIA, UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES

2003 - 2010

Ingeniero Agrónomo

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y FORESTALES, UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA


Producción CyT

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