Aislamiento de virus aviares en cultivos celulares e identificación molecular a partir de muestras provistas por el cliente.: 1 Aislamiento viral en cultivo de células desde muestras biológicas 2 Identif. molecular de virus por PCR/RT-PCR 3 Secuenciación nucleotídica 4 Amplificación de stock viral en cultivo de células 5 Titulación de aislamientos virales en cultivo celular

Oferta Tecnológica

Servicio tecnológico

Prestador Organismo

INSTITUTO DE CIENCIA Y TECNOLOGIA "DR. CESAR MILSTEIN" (ICT - MILSTEIN) ; (CONICET - FUNDACION PABLO CASSARA)

Detalle

Aislamiento e Identificación de virus aviares en muestras biológicas provenientes de pollos y aves silvestres. El servicio está dirigido a veterinarios, productores, parques Nacionales y entidades encargadas de la sanidad animal en general.

Metodología

A partir de muestras biológicas de aves con sintomatología, se realiza el aislamiento viral por infección de cultivos celulares. Luego se realiza la extracción de ácidos nucleicos (ADN o ARN) y, mediante técnicas moleculares de amplificación (PCR o RT-PCR), se detectan de manera precisa, sensible y específica regiones nucleotídicas correspondientes a los genomas de los virus presentes en la muestra. El ADN o el ARN total se obtienen a partir del cultivo infectado y se usa como molde en una rea... A partir de muestras biológicas de aves con sintomatología, se realiza el aislamiento viral por infección de cultivos celulares. Luego se realiza la extracción de ácidos nucleicos (ADN o ARN) y, mediante técnicas moleculares de amplificación (PCR o RT-PCR), se detectan de manera precisa, sensible y específica regiones nucleotídicas correspondientes a los genomas de los virus presentes en la muestra. El ADN o el ARN total se obtienen a partir del cultivo infectado y se usa como molde en una reacción de PCR (Polymerase Chain Reaction) o RT-PCR (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction), respectivamente; siempre en presencia de oligonucleótidos específicos para los virus a detectar. La visualización de los productos de amplificación, se lleva a cabo mediante electroforesis en geles de agarosa al 1,0% teñidos con un intercalante de ADN. A posteriori, y en caso de solicitud del cliente, se realiza la secuenciación de los productos amplificados. Asimismo, si es de interés del cliente, se procede a la amplificación del virus aislado (obtención de stock viral por infección de células y pasajes sucesivos en recipientes de cultivos con mayores superficies). La titulación del stock viral se realiza por el método de dilución límite y el tìtulo se calcula por el método de Reed y Muench como la concentración en la cual el 50% de las células están infectadas ò TCID50 (50% tissue culture infectious dose).

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