Oferta Tecnológica
Servicio tecnológico
Prestador Organismo
Detalle
Generación de anticuerpos monoclonales. Un hibridoma es una línea celular híbrida creada por la fusión de un linfocito B con una célula de mieloma. Esta tecnología permite la producción continua de anticuerpos monoclonales. Los hibridomas y anticuerpos se prepararán a pedido de los clientes del STAN con distintas opciones de partida de acuerdo a las prestaciones contratadas. Dirigido a empresas y organismos públicos.
Metodología
Inmunización: Se contratará el servicio de bioterio del IHEM. Para cada inmunógeno se utilizarán 3 ratones BALB/c, y el STAN pedirá la aprobación del CICUAL UNCUYO. Se inmunizarán 4 veces, cada 30 días, con el péptido-KLH y adyuvante completo de Freund (primera inyección, 0,1 mg) e incompleto en los refuerzos (0,05 mg). Tres días antes de la extracción del bazo, se aplicará un refuerzo sin adyuvante.
Evaluación de respuesta inmune: Los sueros se evaluarán mediante ELISA. Las placas de 96 pocil...
Inmunización: Se contratará el servicio de bioterio del IHEM. Para cada inmunógeno se utilizarán 3 ratones BALB/c, y el STAN pedirá la aprobación del CICUAL UNCUYO. Se inmunizarán 4 veces, cada 30 días, con el péptido-KLH y adyuvante completo de Freund (primera inyección, 0,1 mg) e incompleto en los refuerzos (0,05 mg). Tres días antes de la extracción del bazo, se aplicará un refuerzo sin adyuvante.
Evaluación de respuesta inmune: Los sueros se evaluarán mediante ELISA. Las placas de 96 pocillos se recubrirán con péptido-BSA 2?µg/ml, y se incubarán toda la noche a 4?°C. Luego del bloqueo con PBS-Tween por 60 minutos, se incubará con 50?µl de muestra/pocillo, 60 minutos a 37?°C. Se lavará con PBS-Tween, y añadirán 50?µl/pocillo de anticuerpo anti-IgG de ratón conjugado con HRP, diluido en PBS, 50 minutos. Se lavará y agregará el sustrato TMB. La reacción se frenará con 50?µl/pocillo de H2SO4 0,25?M. Se considerarán positivas las muestras cuya absorbancia a 450?nm sea al menos el doble del control negativo (PBS).
Generación de hibridomas por fusión celular: Células de mieloma NS-0 se fusionarán con esplenocitos del ratón seleccionado en una proporción 1:5, con PEG. Las células fusionadas se resuspenderán en DMEM con gentamicina, suero de caballo al 20%, solución HAT y glutamina. Se sembrarán las células en placas de 96, e incubarán 10 días a 37 °C.
ELISA para detección de anticuerpos monoclonales: Los sobrenadantes de los pocillos con hibridomas serán evaluados mediante ELISA como se describe arriba.
Subclonado de hibridomas y tipificación de Isotipos: Los cultivos positivos y estables serán subclonados 2 veces en agar blando. Los isotipos de los anticuerpos producidos por los clones serán determinados mediante ELISA.
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