Identificación Molecular de virus caninos y felinos: 1) Identificación de agentes virales caninos y felinos mediante técnicas de Biología Molecular. 2) Identificación y posterior secuenciación de los fragmentos obtenidos de muestras positivas.

Servicio tecnológico

Detalle:

Identificación de agentes virales caninos y felinos en muestras biológicas provenientes de perros y gatos; y de animales silvestres. El servicio está dirigido a Veterinarios, criadores, refugios, parques Nacionales, entidades encargadas de la sanidad animal en general.

Metodología:

A partir de diferentes muestras biológicas de animales sospechados de infección, se realiza la extracción de ácidos nucleicos (ADN/ARN). Luego, mediante técnicas moleculares de amplificación (PCR/RT-PCR), se detectan de manera precisa, sensible y específica, secuencias nucleotídicas correspondientes a diferentes regiones de los genomas de los virus en estudio. * El ADN total, es obtenido de las muestras mediante una lisis, luego se realiza un tratamiento con proteinasa K, y posterior purificación con kit Qiaex II, según instrucciones del fabricante. Luego se realiza la PCR (Reacción en cadena de la olimerasa); utilizando “primers” específicos (dependiendo de cuál sea el virus a detectar). * Para los Virus cuyo genoma es ARN, se realiza en primer lugar una extracción del ARN con Trizol, (según instrucciones del fabricante); y luego una RT-PCR (Transcripción Reversa-Reacción en cadena de la polimerasa) en presencia de oligonucleótidos específicos para la detección de cada virus a estudiar. La reacción se realiza con el kit One Step (Qiagen). Cada par de “primers” posee su respectivo ciclado en el termociclador. Para poder visualizar los productos específicos, se realiza un gel de agarosa al 1,0%. Junto con los ADNs obtenidos de las muestras a analizar, se corren en paralelo un control Positivo, el cual se sabe certeramente que posee el ADN de interés, y un control Negativo, que es agua. A posteriori, y en caso de solicitarlo el cliente, se realiza la secuenciación de los fragmentos obtenidos.