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Oferta Tecnológica
Detección de Clostridioides difficile en muestras de materia fecal humana.: 1. Detección de Glutamato Deshidrogenasa (GDH), toxina A y toxina B de Clostridioides difficile por enzimoinmunoensayo (EIA). 2. Detección de colonias de Clostridioides difficile en cultivo y toxina B por reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Servicio tecnológico

Prestador Organismo
CENTRO DE INVESTIGACIONES Y TRANSFERENCIA DEL NOROESTE DE LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES (CIT NOBA) ; (CONICET - UNNOBA - UNSADA)
Detalle
1: La detección de Clostridioides difficile por el método rápido de EIA permite identificar el antígeno GDH simultáneamente a las toxinas A y B, discriminando entre cepas toxigénicas y no toxigénicas. 2: El ChromAgar C. difficile es un medio de cultivo solido específico para C. difficile. Esto permite detectar la presencia de la bacteria en muestras de materia fecal, luego se realiza PCR de punto final para determinar la presencia de toxina B mediante la utilización de cebadores específicos
Metodología
: Prestación 1- Recolección de la muestra de materia fecal con el dispositivo provisto por el Kit, homogenización mediante vortex con el Buffer comercial, sembrado por goteo en los pocillos del casette de EIA, luego de 10 minutos se lee el resultado. Prestación 2- Preparación de medio solido CHROMAgar en placas de Petri, dilución de la muestra de materia fecal en PBS1X estéril, sembrado de la muestra diluida en las placas de Petri con medio específico ChromAgar C. difficile, identificación y ai... : Prestación 1- Recolección de la muestra de materia fecal con el dispositivo provisto por el Kit, homogenización mediante vortex con el Buffer comercial, sembrado por goteo en los pocillos del casette de EIA, luego de 10 minutos se lee el resultado. Prestación 2- Preparación de medio solido CHROMAgar en placas de Petri, dilución de la muestra de materia fecal en PBS1X estéril, sembrado de la muestra diluida en las placas de Petri con medio específico ChromAgar C. difficile, identificación y aislamiento de colonias de C. difficile por fluorescencia con luz UV. Extracción de DNA mediante Boilling a 95°C por 10 minutos, preparado de Master Mix para PCR punto final con dNTP´s, primers específicos para Toxina B y Taq Polimerasa (T-Holmes, Inbio Highway). Ciclado de temperaturas. Detección de amplicones de Toxina B en gel de agarosa teñidos con intercalante de DNA SyBR Safe.
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