Generación de anticuerpos de dominio único derivados de camélidos (VHH o Nanoanticuerpos) a partir de antígenos proteicos o células

Servicio tecnológico

Detalle:

Se obtendrán VHHs a partir de llamas inmunizadas con antígenos de interés, se generará una biblioteca de genes, luego biopanning y expresión de los VHHs candidatos. El producto a entregar puede ser un plásmido codificando el VHH o la proteína purificada. Se utilizarán técnicas de inmunología y biología molecular como extracción de ARN. Western Blot y SDS-PAGE, ELISA, clonado, PCR, biopanning, expresión y purificación de proteínas, para generar VHHs específicos de los antígenos a inmunizar.

Metodología:

Calidad del antígeno: SDS-PAGE/Western Blot. Inmunización: 1 mg de proteína o 1x107 células. Título de inmunoglobulinas: ELISA. Obtención de monocitos, extracción de ARN, retrotranscripción, PCR y clonado en un vector fagémido. Biblioteca: determinación del tamaño y el porcentaje de insertos. Biopanning en fase sólida. Determinación del reconocimiento específico: ELISA de fagos y de periplasma bacteriano. Secuenciación, subclonado en vector de expresión y purificación por cromatografía de afinidad.