Science and Technology Production
Congress
Authorship
Date
2016
Publishing House and Editing Place
SAFIS
Summary
Information provided by the agent in
SIGEVA
Nuestros estudiosprevios, utilizando comomodelos experimentales dos líneas celulares de túbulocolector cortical renal(RCCD1) ? una transfectadaexpresando establemente la AQP2en la membrana apical y otra que no- mostraronque la presencia de AQP2 inducíauna aceleración del ciclo celular mediada enparte por un aumento de losmecanismos RVI (Regulatory VolumeIncrease)dependientes de la isoforma 2 del intercambiador Na+/H+(NHE2).El objetivo de este trabajo fue corroborar e...
Nuestros estudiosprevios, utilizando comomodelos experimentales dos líneas celulares de túbulocolector cortical renal(RCCD1) ? una transfectadaexpresando establemente la AQP2en la membrana apical y otra que no- mostraronque la presencia de AQP2 inducíauna aceleración del ciclo celular mediada enparte por un aumento de losmecanismos RVI (Regulatory VolumeIncrease)dependientes de la isoforma 2 del intercambiador Na+/H+(NHE2).El objetivo de este trabajo fue corroborar estos resultados en unmodelo másfisiológico de células principales de colector cortical: las mpkCCDc14,queexpresan endógenamente la AQP2. Para ello realizamos experimentos deinmunoblotpara la AQP2 y NHE2, conteo celular por cámara de Neubauer ymedición de RVImediante el Scepter CellCounter. Trabajos previos mostraron que lasmpkCCDc14 expresanAQP2 al ser estimuladas durante 24hs por AVP sobreun soporte permeable pero noen uno impermeable (Hasler et al 2002).Nuestrosestudios muestran que la AVP 10nM y el dbAMPc 100uM son capaces deaumentar laexpresión de AQP2 en estas células crecidas sobre soporteimpermeable al serestimuladas durante al menos 4 días. La proliferación de lascélulas inducidaspor AVP o dbAMPc se encuentra aumentada (Número de células, 104:control=3.3±0.4, AVP= 6.2±0.3 p<0.01 n=20; dbAMPc=5.1±0.6 p<0.05n=30). Por otra parte observamos que las células inducidas condbAMPc expresan una mayor cantidad de NHE2 enmembranasplasmáticas biotinilizadas (NHE2/Estreptavidina, unidades arbitrarias:control=0.88±0.07 vs dbAMPc= 1.50±0.15, p<0.05 n=6). Solo la proliferaciónde las célulasmpkCCDc14 inducidas es sensible a la inhibición deNHE2 por HOE-69415µM (Número de células 104: +NHE2=5.1±0.6vs -NHE2= 3.2±0.5, p<0.05 n=30). Nuestros experimentos de volumenmostraronque el porcentaje de RVI en respuesta a un shock hiperosmótico de lascélulasmpkCCDc14 inducidas, pero no el de las control, aumentadurante lafase S del ciclo celular (%RVI con dbAMPc: Fase G1= 1.33±1.33 vs FaseS=15.33±2.90, p<0.05 n=6). Finalmente, observamos que en las célulasinducidasél % de RVI de la fase S era sensible a la inhibición del NHE2 (%RVIcon dbAMPc:+NHE2= 11.67±2.33 vs ?NHE2= 0±0.0, p<0.01 n=6). En conjuntolos resultados corroboran en unmodelo fisiológico más cercano a lo que ocurreen los túbulos colectores renalesnativos que la AQP2 induce un aumento de laproliferación a través laactivación de mecanismos de RVI dependientes de NHE2.
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Key Words
AQP2PROLIFERACIONPHCELULAS RENALES