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Revista Argentina de Microbiología - Caracterización de proteínas Gag quiméricas derivadas de los virus de la inmunodeficiencia de simios (SIV) y de felinos (FIV)
Congress
Authorship:
Esteva, María J ; Affranchino, José L. ; González, Silvia A.Date:
2011Publishing House and Editing Place:
Asociación Argentina de MicrobiologíaISSN:
0325-7541Summary *
Los lentivirus se ensamblan en la membrana plasmática de las células infectadas a partir de la multimerización de la poliproteína viral Gag. Luego que los viriones son liberados al medio extracelular por brotación, la proteasa viral procesa a Gag para dar las proteínas maduras de la partícula: matriz, cápside (CA) y nucleocápside. Nuestro laboratorio ha demostrado recientemente que la CA de SIV cumple un doble rol en el ciclo viral. Como dominio de Gag interviene en las interacciones proteína-proteína que conducen a la formación de partículas y como proteína madura, multimeriza para formar el core viral. Decidimos entonces establecer la relación funcional entre la CA de SIV y la de FIV, ya que si bien FIV muestra similitudes con los lentivirus de primates (SIV y HIV), exhibe importantes diferencias genéticas y a nivel de mecanismos de replicación. Las proteínas CA de SIV y FIV poseen un tamaño de 230 y 222 aminoácidos, respectivamente, y exhiben solamente un 30% de identidad a nivel aminoacídico. Con el objeto de identificar en las CA de SIV y FIV dominios tanto funcionalmente equivalentes como distintivos de cada proteína, decidimos generar y caracterizar virus quiméricos SIV-FIV intercambiando sus dominios CA. Construimos los virus SIVCAFIV y FIVCASIV conservando las secuencias amino y carboxilo terminales de la CA de cada virus parental que son reconocidas por la proteasa viral, de manera de no alterar el procesamiento de las proteínas Gag quiméricas. Al caracterizar el fenotipo del virus quimérico SIVCAFIV se observó que éste se ensambla en viriones con una eficiencia ligeramente menor que la del SIV salvaje. Sin embargo, el virus quimérico no es infectivo en los ensayos de infectividad de ciclo único en los que se emplean las células indicadoras TZM-bl. Por otro lado, al analizar la composición de los viriones del SIVCAFIV, además de detectar a la CA de FIV, se visualizan subproductos de la misma lo que sugiere cierto grado de inestabilidad del core formado por la CA de FIV en el virus quimérico. Finalmente, cuando se investigaron las propiedades biológicas del virus FIVCASIV se estableció que el reemplazo en FIV de su CA por la de SIV inhibe la capacidad de ensamblado de la proteína Gag quimérica. Nuestros resultados indican que, en el contexto de la proteína Gag de SIV, el dominio CA de FIV permite el ensamblado de viriones aunque los mismos no son infectivos. En cambio, la sustitución en FIV de su CA por la de SIV resulta en una proteína Gag quimérica que es incapaz de formar partículas. Information provided by the agent in SIGEVAKey Words
VIRUS QUIMERICOS SIV-FIVPROTEINA CAPSIDEPOLIPROTEINA GAGLENTIVIRUS