Science and Technology Production
Libro de Resumenes - Ensamblado in vitro de la poliproteína Gag del virus de la inmunodeficiencia de simios (SIV)
Congress
Authorship:
Rauddi, María L. ; Affranchino, José L. ; González, Silvia A.Date:
2007Publishing House and Editing Place:
Asociación Argentina de MicrobiologíaSummary *
El virus de la inmunodeficiencia de simios (SIV) es un retrovirus ampliamente utilizado como modelo de las infecciones causadas por los virus humanos HIV-1 y HIV-2. SIV se ensambla en la membrana plasmática de las células infectadas como consecuencia de la oligomerización de la poliproteína viral Gag y los viriones resultantes son luego liberados al medio extracelular por brotación. Nuestro laboratorio ha demostrado que en células de mamífero la proteína Gag de SIV es capaz de formar partículas similares a viriones inmaduros en ausencia de otras proteínas virales, lo cual hemos aprovechado para identificar dominios de Gag involucrados en la morfogénesis viral. En estos estudios previos de nuestro laboratorio sobre el ensamblado retroviral fue necesario distinguir si el efecto inhibitorio sobre la producción de viriones de una mutación en el gen gag resultaba de un efecto directo sobre las interacciones Gag-Gag o si en cambio era consecuencia de la alteración de otros procesos, tales como el transporte de Gag a la superficie celular, la interacción de Gag con la membrana plasmática, o la brotación de partículas. Con el objeto de analizar la oligomerización de Gag en condiciones definidas, desarrollamos un sistema que permite su ensamblado in vitro. La proteína Gag de SIV fue expresada en E. coli con una etiqueta N-terminal de polihistidina, purificada por cromatografía de afinidad e incubada en condiciones definidas de temperatura, pH y concentración salina. El posterior análisis bioquímico y por microscopía electrónica de los productos de estos ensayos indica que bajo estas condiciones Gag es capaz de oligomerizarse en partículas esféricas. Asimismo estudiamos cómo afecta a la oligomerización de Gag la presencia de detergentes o de ácidos nucleicos. En resumen, hemos establecido condiciones experimentales que permiten la oligomerización in vitro de Gag de SIV en estructuras particuladas, lo que será de utilidad para identificar los dominios de esta proteína que participan en interacciones Gag-Gag. Information provided by the agent in SIGEVAKey Words
ENSAMBLADO IN VITROPOLIPROTEINA GAGVIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA DE SIMIOSLENTIVIRUS