Canales de calcio de tipo P/Q, su influencia sobre la expresión de otros canales de calcio y la modificación de su expresión mediante vectores amplicón derivados del virus del herpes simple tipo I

Thesis

Summary *

El influjo de iones calcio a través de canales es un proceso importante que permite acoplar estímulos eléctricos o químicos con la función celular en la mayoría de las sinapsis del sistema nervioso. El canal de calcio de tipo P/Q tiene un rol importante en la liberación de neurotransmisores. Diversas mutaciones en este canal se relacionan con varias patologías en humanos y animales. En la primera parte de la tesis analizamos la expresión de los genes de las subunidades principales de los canales de calcio en cerebelo y cerebro de animales carentes de la subunidad α1A del canal de calcio tipo P/Q. En base a los resultados presentados, y a los reportados por otros autores, es posible concluir que la compensación funcional que surge de la eliminación del canal P/Q no involucra un aumento en la expresión génica de otros canales miembros de la misma familia. Esta modificación, en cambio, altera la expresión de genes de otras familias de canales de calcio, lo que podría contribuir a una regulación anormal de la función motora e hiperexcitabilidad neuronal que daría origen a la actividad epileptiforme anormal observada en estos animales. En la segunda parte de la tesis utilizamos vectores virales que expresan una variante de canales de calcio de tipo P/Q humano en distintos modelos experimentales. En células HEK293 observamos que el canal se expresa y se acumula en el citoplasma. Registramos corrientes cuya farmacología indica que son conducidas por el canal P/Q. El vector viral tiene capacidad infectiva en células de hipocampo en cultivo, en cortes de cerebelo e hipocampo e in vivo en cerebelo. La mayoría de las células infectadas son de tipo glial, aunque también se observaron algunas neuronas infectadas. Estos trabajos dejan establecidos un número de dificultades y de propuestas para mejorar el titulo de los vectores, su capacidad y especificidad infectiva. El sistema de expresión a través de vectores amplicón también se utilizó para interferir con la expresión del canal P/Q mediante la estrategia de interferencia por ARN. Dos secuencias no mostraron capacidad de inhibición, mientras que resultados preliminares indican que una tercera secuencia dirigida contra el inicio de la región codificante de la subunidad principal del canal P/Q disminuye su expresión. Information provided by the agent in SIGEVA