Science and Technology Production
Thesis
Authorship
Date
01/01/2003
Summary
Information provided by the agent in
SIGEVA
En el interés de conocer los mecanismos que rigen la neurogénesis decidimos estudiar y caracterizar la acción de moléculas tróficas sobre la sobrevida y la muerte celular y hemos desarrollado un bioensayo neural in vitro. Es imprescindible resaltar que hasta la actualidad no había bioensayos establecidos simples, confiables, reproducibles y que se ajusten a ecuaciones preestablecidas para el estudio de la acción de las moléculas tró...
En el interés de conocer los mecanismos que rigen la neurogénesis decidimos estudiar y caracterizar la acción de moléculas tróficas sobre la sobrevida y la muerte celular y hemos desarrollado un bioensayo neural in vitro. Es imprescindible resaltar que hasta la actualidad no había bioensayos establecidos simples, confiables, reproducibles y que se ajusten a ecuaciones preestablecidas para el estudio de la acción de las moléculas tróficas y de la apoptosis en mini-cultivos de células neurales. La metodología de análisis óptima la aplicamos luego al estudio de la acción de factores de distintas familias tróficas (GDNF y CNTF), sobre la apoptosis inducida por deprivación sérica en células N2a. Ambos factores tróficos mostraron la capacidad de reducir la apoptosis inducida por deprivación sérica en células neuronales en cultivo. Por otro lado, estudiamos también la eficiencia de transducción y el efecto citopático de la infección con vectores adenovirales sobre células neurales en cultivo. El porcentaje de células transducidas fue medido por técnicas citoquímicas (X-gal), y la muerte celular evaluada por tinción diferencial con DAPI y la técnica TUNEL. Nuestros resultados indican que la infección con vectores adenovirales de primera generación, como es el caso del RAdβgal, induce muerte celular por apoptosis en células gliales en cultivo y esta muerte es dependiente de la MOI. Además evaluamos la capacidad del GDNF de reducir esta apoptosis, comparando entre la protección ejercida por el GDNF agregado de manera exógena, y con el GDNF como transgén (dentro del RAdGDNF). Los cultivos que recibieron estos tratamientos mostraron una disminución estadísticamente significativa de la apoptosis inducida por los vectores adenovirales per se. Además la incapacidad del GDNF (y también del CNTF) de disminuir la apoptosis basal de nuestros cultivos sugiere mecanismos alternativos de muerte celular. Por lo que concluimos que la acción neuroprotectora de estos factores tróficos parece estar determinada por la naturaleza de la inducción de la apoptosis.
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Key Words
factores troficossistema nerviosomuerte celularapoptosis