Función de autoanticuerpos contra receptores muscarínicos en pacientes con cáncer de mama.

Thesis

Summary *

El sistema colinérgico no neuronal (SCnN) se considera constituido por la acetilcolina, la enzima que la sintetiza, la colina acetil transferasa, la enzima que la degrada, la acetilcolinesterasa y los receptores nicotínicos y muscarínicos (M)presentes en células que no tienen origen nervioso. Este sistema ha sido implicado en numerosas funciones fisiológicas y patológicas. Como componentes del SCnN, los receptores M se sobreexpresan en un gran número de tumores. Detectamos una regulación positiva de la expresión de receptores M en tumores mamarios murinos mientras que dichos receptores están ausentes en células normales de la misma estirpe. Además demostramos que los portadores del tumor mamario murino LM3 poseen en su suero anticuerpos que reconocen y activan a los receptores M. Teniendo en cuenta estos antecedentes y que también detectamos sobreexpresión de receptores M en muestras de tumores de pacientes con cáncer de mama, así como en células de la línea de adenocarcinoma mamario humano,MCF-7, nos propusimos identificar la presencia de autoanticuerpos contra receptores M en el suero de estas pacientes. Los mismos fueron detectados en la fracción IgG del suero de pacientes en estadío T1N0Mx (tamaño tumoral 2cm, sin metástasis ganglionares y metástasis a distancia sin determinar). Demostramos que la IgG-T1N0Mx activa a los receptores M3 y M4 expresados en células MCF-7 y estimula la proliferación celular de manera dependiente de la concentración y con mayor eficacia que el agonista muscarínico sintético carbacol, el que ejerce su efecto sólo por estimulación de los receptores M3. Además, la IgG utilizada como control obtenida de pacientes con fibroadenoma benigno de mama (IgG-FBA) no modificó significativamente la proliferación de células MCF-7. Por otra parte, ni la IgG-T1N0Mx, ni el carbacol modificaron la proliferación de células MCF-10A, una línea no tumorigénica de mama humana que no expresa receptores M. Teniendo en cuenta que los receptores M3 están involucrados en el efecto proliferativo de la IgG-T1N0Mx y del carbacol demostramos la participación de la vía de señalización fosfolipasa (PLC)/óxido nítrico sintasa (NOS)/proteína quinasa C (PKC) que clásicamente se asocia a este subtipo de receptor. Demostramos la expresión de la PLC2 y de las isoformas NOS1 y NOS3 y comprobamos que ambos agonistas producen un aumento en la síntesis de monofosfato de inositol (IP1) y de óxido nítrico (NO). Por otra parte, tanto la IgG-T1N0Mx como el carbacol inhibieron la producción del AMPc, lo que demuestra la funcionalidad del receptor M4 expresado en las células MCF-7. También estudiamos el efecto de la IgG-T1N0Mx en la migración de las células MCF-7 y en la actividad de metaloproteasa 9 (MMP-9) en el sobrenadante de cultivo de las células tumorales, ya que ambos parámetros representan la capacidad invasiva y metastásica del tumor. Observamos un incremento tanto en la migración como en la actividad de MMP-9 soluble, efectos que se redujeron en presencia de antagonistas selectivos de los receptores M3 y M4. Por su parte, el carbacol produjo un efecto similar tanto sobre la migración celular como sobre la actividad de MMP-9 pero de menor magnitud que el que ejerció la IgG-T1N0Mx.Evidenciamos la participación de la vía PLC/NOS/PKC para ambos efectos biológicos producidos por la IgG-T1N0Mx y el carbacol. Es sabido que la angiogénesis es un paso central en la progresión de tumores sólidos. En este trabajo demostramos que tanto la IgG-T1N0Mx como el carbacol aumentan la expresión del factor de crecimiento del endotelio vascular-A (VEGFA)por activación de los receptores M3 y M4 en células MCF-7. Además investigamos el efecto de la IgG-T1N0Mx y del carbacol sobre la respuesta neovascular producida por células MCF-7 en ratones NUDE hembra y demostramos que ambos tratamientos potencian la respuesta angiogénica de las células tumorales per se, por activación de receptores M3 y M4 en la piel del sitio de inoculación tumoral Concluimos que la presencia de anticuerpos contra receptores M en el suero de pacientes con cáncer de mama en estadío 1 promovería la progresión tumoral incrementando la capacidad proliferativa, invasiva y angiogénica del tumor mamario MCF-7 y podría ser considerada como un factor de riesgo en la promoción del cáncer de mama. Information provided by the agent in SIGEVA