Science and Technology Production
Congress
Authorship
VOLPE, SEBASTIANO
;
Faraj, Santiago E.
;
Montes, Mónica R.
;
Filomatori, Claudia V.
Date
2025
Publishing House and Editing Place
Sociedad Argentina de Virología
Summary
Information provided by the agent in
SIGEVA
El virus chikungunya (CHIKV) es un patógeno humano reemergente transmitido por mosquitos y pertenece al género . Su genoma es un ARN de polaridad positiva que presenta dos marcos de lectura abiertos (ORFs), y en los extremos, las regiones 5’ y 3’ no codificantes (UTRs). Cuando el virus infecta una célula, se sintetizan primero las proteínas no estructurales codificadas en el primer ORF, las cuales se ensamblan en el complejo de replicación, encarga...
El virus chikungunya (CHIKV) es un patógeno humano reemergente transmitido por mosquitos y pertenece al género . Su genoma es un ARN de polaridad positiva que presenta dos marcos de lectura abiertos (ORFs), y en los extremos, las regiones 5’ y 3’ no codificantes (UTRs). Cuando el virus infecta una célula, se sintetizan primero las proteínas no estructurales codificadas en el primer ORF, las cuales se ensamblan en el complejo de replicación, encargado de sintetizar la cadena de ARN negativa. Esta sirve como molde tanto para la síntesis del ARN genómico como del ARN subgenómico. Este último codifica para las proteínas estructurales (segundo ORF). Se ha propuesto que las UTRs del genoma de los ARN-virus contienen secuencias y/o estructuras secundarias de ARN que regulan las distintas etapas del ciclo de replicación. En particular, el 5’UTR se pliega en una horquilla o stem-loop (5’SL), con un tallo de 9 pares de bases y un bucle de 5 nucleótidos. Se plantea que el 5’SL podría funcionar como promotor para la síntesis de ARN y además, se ha demostrado que estructuras análogas en otros alfavirus contribuyen a evadir la respuesta antiviral en células humanas. En este trabajo, nos propusimos estudiar la relevancia funcional del 5’SL en líneas celulares que presentan distintas estrategias antivirales. Para ello, diseñamos una batería de mutantes en el contexto de un replicón de CHIKV, en los cuales se desarmó total o parcialmente la estructura del 5’SL, o se introdujeron sustituciones puntuales en los nucleótidos del bucle. El replicón contiene los genes de las luciferasas de Renilla (RLuc) y Firefly (FLuc) fusionados al 1er y 2doORF, respectivamente, lo que permite monitorear diferentes etapas de la replicación viral. La actividad de RLuc a las 2 horas post-transfección refleja la traducción del primer ORF, mientras que a las 24 horas es un indicador de la síntesis del ARN genómico. Por su parte, la actividad de FLuc a las 24 horas permite estimar la síntesis y traducción del ARN subgenómico. Mediante transcripción , sintetizamos moléculas de ARN del replicón silvestre y mutantes, que luego transfectamos en células en cultivo. Tanto en células de mamífero BHK, como de mosquito C6/36, la disrupción completa del tallo afectó negativamente la traducción e impidió la síntesis de ARN genómico. Además, las mutantes con disrupción parcial del tallo no alteraron la traducción y produjeron un efecto leve sobre la síntesis y traducción de ARN subgenómico. Sin embargo las mutantes en el bucle mostraron diferencias entre ambos tipos celulares: en BHK no alteraron la traducción, mientras que en C6/36 afectaron negativamente tanto la traducción como la síntesis de ARN subgenómico. Como conclusión, nuestros resultados indican que el 5’SL es esencial para el ciclo replicativo de CHIKV, aunque tolera ciertos desapareamientos en su estructura, mientras que el bucle cumple un rol modulador dependiente del hospedador en la síntesis del ARN subgenómico.
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Key Words
ESTRUCTURAS DE ARNREPLICACIÓN VIRAL5'UTRCHIKUNGUNYA