Science and Technology Production
Congress
Authorship
Micheloni Josefina
;
AGNELLA, YANINA PAOLA
;
Caprile Luis
;
Gerhardt Nadia
;
Sesma Juliana
Date
2024
Publishing House and Editing Place
Sociedad de Biología Rosario
Summary
Information provided by the agent in
SIGEVA
DESARROLLO DE qPCR y PCR DIGITAL PARA LA DETECCIÓN DE Legionella spp. YCOMPARACIÓN DE LA SENSIBILIDAD ENTRE AMBOS MÉTODOSAntecedentes: Legionella spp., el agente causal de legionelosis es un bacilo gramnegativoampliamente distribuido en sistemas acuáticos, donde puede sobrevivir en un amplio intervalo decondiciones fisicoquímicas. Presenta la capacidad de colonizar sistemas de distribución yalmacenamiento de agua potable. Se ha observado que Legionella ...
DESARROLLO DE qPCR y PCR DIGITAL PARA LA DETECCIÓN DE Legionella spp. YCOMPARACIÓN DE LA SENSIBILIDAD ENTRE AMBOS MÉTODOSAntecedentes: Legionella spp., el agente causal de legionelosis es un bacilo gramnegativoampliamente distribuido en sistemas acuáticos, donde puede sobrevivir en un amplio intervalo decondiciones fisicoquímicas. Presenta la capacidad de colonizar sistemas de distribución yalmacenamiento de agua potable. Se ha observado que Legionella pneumophila, en particular elserogrupo 1 es el principal agente etiológico de la legionelosis. Objetivo: Poner a punto la PCRdigital y la qPCR dirigidas contra los genes ssrA, mip y wzm para determinar Legionella spp.,Legionella pneumophila y Legionella pneumophila serogrupo 1 respectivamente; y posteriormenterealizar una comparación en la sensibilidad de ambas metodologías. Materiales y Métodos: Basadoen la literatura, se sintetizaron los primers y sondas. Se optimizo la metodología modificando latemperatura de annealing, el tiempo de cada etapa y el número de ciclado, utilizando como controlpositivo un plásmido que contenía las secuencias de los tres genes a amplificar. Resultados: Se logroponer a punto la PCR digital y la qPCR para la determinación de los genes ssrA, mip y wzm. Lacomparación de sensibilidad entre ambas metodologías se llevó a cabo a través del análisis dediluciones seriadas del plásmido control utilizando únicamente el par de primers y sonda para el genwzm (Legionella pneumophila serogrupo 1). Los resultados preliminares indican un rango similar desensibilidad. Conclusión: Si bien se logró poner a punto ambas metodologías, el hecho de que lassensibilidades sean similares sugiere que deberíamos continuar trabajando en la optimización de laPCR digital. También es posible que cuando se analicen muestras de aguas reales, donde esesperable la presencia de inhibidores, encontremos una mayor diferencia de sensibilidad entre ambosmétodos, dado que la PCR digital posee mayor tolerancia a los inhibidores.
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Key Words
QPCRLegionella sppddPCR