Science and Technology Production
Congress
Authorship
Date
2005
Publishing House and Editing Place
Sociedad Argentina de Microbiología
Summary
Information provided by the agent in
SIGEVA
El Virus de la Inmunodeficiencia Felina (FIV) es un Lentivirus complejo que comparte muchas de sus características genómicas, estructurales y bioquímicas con el virus de la Inmunodeficiencia Humana (HIV). La enfermedad, conocida como Síndrome de Inmunodeficiencia Felina (SIF) se caracteriza por fiebre, linfoadenopatías, leucopenia, anemia, anorexia y caquexia, agravada por infecciones secundarias y desordenes neurológicos. En nuestro país, en 199...
El Virus de la Inmunodeficiencia Felina (FIV) es un Lentivirus complejo que comparte muchas de sus características genómicas, estructurales y bioquímicas con el virus de la Inmunodeficiencia Humana (HIV). La enfermedad, conocida como Síndrome de Inmunodeficiencia Felina (SIF) se caracteriza por fiebre, linfoadenopatías, leucopenia, anemia, anorexia y caquexia, agravada por infecciones secundarias y desordenes neurológicos. En nuestro país, en 1994 se detectaron por primera vez anticuerpos séricos contra la enfermedad en gatos domésticos y en 1996 se describió el aislamiento y la diversidad genética de las cepas circulantes. La transmisión de esta enfermedad se produce principalmente por mordeduras pero también puede darse por la vía sexual, in útero pre e intra partum así como el contagio de las crías por la leche materna. La infección es más común en gatos mestizos, vagabundos o con libre acceso al exterior. Diferentes estudios han revelado que el genoma del FIV está compuesto principalmente por tres marcos abiertos de lectura (ORF), gag, pol y env, como ocurre con otros lentivirus. Entre ellos, el gag codifica un precursor, la p50, que luego de ser clivada origina tres proteínas mayores del core: p24, p15 y p10. De estas, la p24 ha sido identificada como antígeno asociado de grupo y es la proteína estructural predominante en el core viral. El objetivo de este trabajo fue el de generar un sistema heterólogo de expresión de proteínas, utilizando Escherichia coli para la producción y purificación de grandes cantidades de p24 recombinante (p24r) de alta calidad para su posterior utilización en estudios de diagnostico así también como inmunógeno. Para ello, se aisló el DNA proviral a partir de células infectadas con FIV para ser utilizado como molde para una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con primers específicamente diseñados para amplificar el ORF que codifica para la p24. El producto amplificado fue luego clonado en el vector de expresión pET22b(+) (Novagen). Con la construcción así obtenida se transformaron bacterias competentes Escherichia coli BL21(DE3). Una vez obtenidas las bacterias recombinantes se realizó un cultivo Batch con medio LB utilizando IPTG como inductor de la expresión. Al finalizar el cultivo se recuperó la fracción del periplasma bacteriano por medio de un tratamiento de shock osmótico y, posteriormente, la mencionada fracción fue analizada por Western-Blot lo que permitió detectar una banda de peso molecular relativo correspondiente a 24KD que fue reconocida específicamente por anticuerpos policlonales contra el FIV. Nuestros resultados preliminares demuestran que la p24r recombinante parece no presentar diferencias antigénicas con la proteína viral y que el método desarrollado facilita una rápida producción y purificación de la p24r para su posterior uso en estudios serológicos de diagnostico
Show more
Show less
Key Words
Proteína de la capside viral (p24)Inmunodeficiencia felina