Servicio de expresión de proteínas recombinantes en Escherichia coli

Servicio tecnológico

Detail:

Corresponde a la obtención de un clon de E. coli que expresa una proteína recombinante de origen bacteriano para su uso en investigación. Incluye clonado de una secuencia codificante provista por el demandante en un vector de expresión comercial o provisto por el demandante, transformación de E. coli, la expresión de la proteína recombinante en E. coli y la validación de la actividad en el caso de que la proteína expresada sea una enzima de función conocida.

Methodology:

Se clonará la secuencia de ADN codificante de la proteína de interés en un vector de expresión para la bacteria E. coli. El vector de expresión podrá ser de origen comercial o uno provisto por el demandante. El vector obtenido se amplificará en la cepa DH5? de E. coli, se purificará y se utilizará para transformar una cepa comercial de E. coli. En todos los casos se utilizarán técnicas de rutina de biología molecular y microbiología. A partir de un clon transformado, se realizará una prueba de inducción y expresión a escala laboratorio de la proteína recombinante de interés, utilizando técnicas de rutina de microbiología. La expresión de la proteína recombinante se validará mediante el análisis del perfil de proteínas totales presentes en la bacteria por electroforesis de proteínas seguida de tinción con Coomassie blue o por western blot y revelado con anticuerpos específicos o contra eventuales etiquetas incorporadas en la secuencia. En el caso de requerirse anticuerpos específicos que no estén disponibles en el mercado, estos deberán ser provistos por el demandante. En el caso de la expresión de enzimas de función conocida, se realizará una extracción y purificación parcial de la proteína en condiciones nativas y utilizando técnicas simples y de rutina para el laboratorio y se determinará la actividad enzimática. En el caso de determinaciones de actividad enzimática que no sean de conocimiento abierto, el demandante deberá proveer el protocolo de actividad optimizado y eventualmente los reactivos necesarios que no se encuentren disponibles en el mercado. Al finalizar el servicio se entregará un clon de E. coli que expresa la proteína recombinante de interés y un informe del trabajo realizado. El servicio no incluye la optimización de la producción de la proteína recombinante.