Análisis de actividad proteolítica y de inhibidor de proteasas en muestras biológicas

Servicio tecnológico

Detail:

El objetivo del servicio es realizar la detección, cuantificación y tipificación de actividad proteolítica y determinar actividad inhibidora de proteasas en muestras biológicas (cultivos bacterianos, suspensiones y extractos celulares, medio libre de células, alimentos, entre otras)

Methodology:

Detección de proteasas: Se determina actividad azocaseinolitica por método colorimétrico midiendo la A335 de los productos de hidrólisis solubles en TCA. Se ajustan las condiciones de medición según tipo de muestra (dillución, temperatura y tiempo de reacción). La actividad se expresa en unidades arbitrarias U definidas como la cantidad de enzima que produce un aumento de A335=1 en 1 hora (A335.h-1) y se refiere por mL de muestra (U.mL -1) o por mg de proteína de la muestra (U.mg prot. -1). Opcional: tipificación en serina-metalo-aspartil-cisteina proteasa; análisis por zimografía. Detección de inhibidores de proteasas: La muestra se preincuba con una proteasa de referencia (tripsina, quimotripsina, subtilisina) a 25 C durante 30 min, se agrega azocaseína y se desarrolla el ensayo anterior. El resultado se expresa como unidades de inhibidor UI definidas como la cantidad de inhibidor capaz de inhibir el 50 % de la actividad de la proteasa de referencia. Cada determinación de realiza por duplicado