Determinación de marcadores séricos de diabetes autoinmune y otros anticuerpos relacionados.: 3) Determinación por radiometría (RBA) del marcador sérico IA-2A, de diabetes autoinmune

Servicio tecnológico

Detail:

El anticuerpo anti IA-2 (IA-2A), dirigido hacia el respectivo antígeno presente en las células beta de los islotes pancreáticos, representa un marcador sérico específico de agresión autoinmune en la diabetes mellitus insulinodependiente, tipo 1. La aplicación práctica de este análisis en la Medicina Asistencial Diabetológica presenta un creciente interés por su valor predictivo y diagnóstico.

Methodology:

Test de unión de radioligando (RBA): El trazador [35S]IA-2ic (correspondiente al dominio intracelular autoantigénico) se prepara a partir de un sistema de expresión eucariota (lisado de reticulocitos de conejo de fuente comercial) para la transcripción y traducción in vitro, utilizando el ADN codificante para la proteína humana especificada y [35S]metionina como aminoácido radiactivo. Luego de la purificación por columna de exclusión molecular, el trazador (aprox. 10.000 cpm) se incuba con los sueros bajo análisis (2.5 l de cada uno) en una solución reguladora, durante toda la noche a 4 ºC. Luego de una etapa separativa con Proteína A-Sepharose, los precipitados resuspendidos en detergente y centrifugados, producen sobrenadantes que se cuentan por centelleo líquido. El procesamiento de los resultados incluye datos obtenidos de sueros normales de control para establecer el valor de corte. La expresión de los resultados de IA-2A se efectúa en Unidades de unión porcentual del trazador (B%).